数字 PCR 适合初学者的 dPCR首页应用与见解数字 PCR 适合初学者的 dPCR dPCR 与 qPCR 应用选择初学者指南 dPCR 的演变

当今复杂的研究问题需要超出传统 PCR 技术能力的深度信息。第三代数字 PCR 是缩小这一差距并成为解决这些日常研究问题的更简单、更实用的技术。数字 PCR 的概念自 1992 年以来就已存在，当时 Sykes 等人将其描述为\"有限稀释 PCR”。这种通用方法使用终点分析和泊松统计来量化样品中存在的核酸分子的绝对数量。随后是 Vogelstein 和 Kinzler 在 1999 年的革命性工作，他们开发了一种方法，通过该方法将样品稀释并分配到称为分区的单独反应中，并且单个反应产物经扩增后有荧光信号进行检测分析。en 创造了\"数字 PCR”这个术语，正如我们今天所知道的那样。多年来，这些方法已经被创新和商业化，以得到更广泛的采用。人们可以在微流控芯片和圆盘、微阵列和基于油水乳液的微滴或液滴晶体上进行数字 PCR，最近还可以在类似 qPCR 的板上进行数字 PCR。

还在寻找什么是数字 PCR 的答案吗？查看我们的工作台指南，了解有关数字 PCR 的基础知识、优势、局限性和应用的更多信息。数字 PCR 的力量 – 了解它能为您做什么

数字 PCR 是一种高度精确的方法，可检测敏感且可重复的核酸检测和定量。通过将样品分成多个分区来进行测量，使得任何单独的反应中存在零个或一个或多个目标分子。在终点 PCR 循环后分析每个分区是否存在荧光信号（阳性反应）或不存在（阴性反应），并计算样品中存在的分子的绝对数。它不依赖于样品目标定量的标准曲线。消除对标准曲线的依赖可减少误差并提高精度。

查看视频4 个步骤即可实现绝对定量n红色 - 背景（gDNA、cDNA；引物/探针；预混液）\"},{\"Image\":\"/-/ media/project/qiagen/qiagen-home/content-worlds/digital-pcr/1-icon3-dpcr.jpg\",\"Title\":\"PCR 反应分为数千个单独的反应​\",\"Description\":null}, {\"Image\":\"/-/media/project/qiagen/qiagen-home/content-worlds/digital-pcr/1-icon2-dpcr.jpg\",\"Title\":\"分区的终点 PCR 扩增\", \"Description\":\"绿色 - 阳性反应
n蓝色 - 阴性反应\"},{\"Image\":\"/-/media/project/qiagen/qiagen-home/content-worlds/digital-pcr/1- icon4-dpcr.jpg\",\"Title\":\"读出d 绝对量化​\",\"Description\":null}]\"layout-columns=\"四列\" show-card-slider=\"false\"tile-variant=\"false\"display-tooltips=\"false\"hide-default- images=\"true\" Tagswhitelist=\"h1|h2|h3|h4|h5|h6|p|span|sup|sub|strong|b|em|i|ul|ol|li|a\">分而治之

虽然样品的制备方式与 qPCR 类似，但样品分配（即在扩增之前将样品分为数千个单独的反应）是数字 PCR 所独有的。与 qPCR 中的批量分析不同，数字 PCR 通过将分子随机分布到分区中，最大限度地减少了竞争目标的影响，并提高了稀有物质检测的精度和灵敏度。

它使研究人员能够：

p>定量低丰度靶标或复杂背景中的靶标检测并区分等位基因变异 (SNP) 监控靶标水平的小倍变化，否则 qPCR 无法检测到分区的三大优势n

提高检测限 (LOD)

n

放大器化并检测单个目标分子

n\"},{\"Title\":\"赋予富集效果​\",\"Description\":\"

n
• 增加比率 –目标与背景
n

\"},{\"Title\":\"提供卓越的精度和线性度​\",\"Description\":\"

n
• 测量单个分子与目标分子集合浓度
n
• 分区越多精度越高
n
• 分区越多动态范围越宽
n

\"}] \"layout-columns =\"三列”show-card-slider =\"false”tile-variant =\"false”display-tooltips =\"false”hide-default-images =\"true”tagswhitelist =\"h1 | h2 | h3” |h4|h5|h6|p|span|sup|sub|strong|b|em|i|ul|ol|li|a\">选择 dPCR 与 qPCR 比较和对比两种方法，了解哪一种最适合您的需求并了解如何将当前的 qPCR 检测转换为 dPCR。了解更多泊松定律赋予分区意义

与与实时qPCR相比，数字PCR并不依赖于每个扩增循环来确定目标分子的相对量，而是依靠泊松统计来确定终点扩增后的绝对目标量。

由于目标分子随机分布在所有可用分区中，泊松分布估计每个分区的平均分子数（零、一个或多个）并计算每个正分区的目标分子的副本。对正分区和正分区的数量进行泊松统计分析阴性反应可对目标序列进行精确、绝对的定量。

将统计数据应用于绝对定量

在数字 PCR 实验中，绝对定量依赖于目标分子在分区中的随机分布，并且数据预计符合泊松分布。泊松分布于 1837 年以法国数学家 Siméon Denis Poisson 的名字命名，适用于固定时间内给定数量的事件发生的概率，前提是这些事件以已知的恒定速率发生并且与前一个事件的发生无关。

给定：有效分区：8000正分区：4000λ= −ln 有效分区数 ― 正分区数有效分区数 λ= −ln8000 ― 40008000= 0.693 每个分区计算的目标副本 λ= −ln 有效分区数 ― 正分区数有效分区数 给定：分区体积为 V = 0.23 nlλvolume=λV [μl]1000 = 3013 个拷贝/μl 计算出每μl的目标拷贝数λvolume=0.6930.23x简单数学计算数字 PCR 实验的泊松定律的 n 看起来像这样： λ 是这些事件的期望值，并且会告诉您拷贝/分区最可能的平均值是计算拷贝/μl 中目标基因的估计浓度We\'这里将指导您完成工作流程，提供教程并规划您的第一个数字 PCR 实验。开始精选网络研讨会演讲者：Laima Antanaviciute，
n博士，市场开发经理 – dPCR/PCR，QIAGEN

\"，\"链接\"：\"/us/knowledge-and-support/knowledge-hub/events-and-webinars/webinars/finding-a-needle-in-a-haystack-- -the-power-of-digital-pcr\",\"LinkText\":\"立即观看\",\"LinkTarget\":\"_blank\"},{\"Image\":\"/-/media/project/qiagen/qiagen-home/content -worlds/digital-pcr/s-9535-gen-daniel-lofgren.jpg\",\"Title\":\"数字 PCR 及其应用的优点 – 分区的力量g\",\"Description\":\"演讲者：Daniel Heinz Löfgren，
n理学硕士，市场开发经理 – dPCR/PCR，QIAGEN\"，\"链接\"：\"/us/knowledge-and-support/knowledge-hub/events-and-webinars/webinars/advantages-of-digital-pcr-and-its-applications\"，\"LinkText \":\"立即观看\",\"LinkTarget\":\"_blank\"},{\"Image\":\"/-/media/project/qiagen/qiagen-home/content-worlds/digital-pcr/s-1004-8-dpcr -jim-huggett.jpg\",\"Title\":\"使用数字 PCR 进行高精度分子测量​\",\"Description\":\"演讲者：Jim Huggett 博士，
n国家测量实验室首席科学家\" ,\"链接\":\"https://www.bigmarker.com/qiagen/The-use-of-digital-PCR-for-high-accuracy-molecular-measurement​\",\"LinkText\":\"立即观看\",\" LinkTarget\":\"_blank\"}]\"layout-columns=\"三列\"show-card-slider=\"false\"tile-variant=\"false\"display-tooltips=\"false\"hide-default-images=\"true\"tagswhitelist=\"h1|h2|h3|h4|h5|h6|p|span|sup|sub|strong| b|em|i|ul|ol|li|a\">有关数字 PCR 的常见问题解答数字 PCR 新闻有兴趣根据您感兴趣的领域接收同行故事、应用说明以及即将举行的网络研讨会的信息吗？订阅新闻通讯阅读列表Vogelstein B andKinzlerKW (1999). 数字 PCR. Proc NatAcdSci USA 96, 9236–9241.Baker M (2012). 数字 PCR 取得了长足进步.Nat 方法 9, 541–544.Pohl G 和 ShihIeM(2004). 数字 PCR 原理和应用PCR. Expert Mol Rev Diagn 4, 41–47.Sykes PJ et al. (1992). 通过使用有限稀释对 PCR 靶标进行定量.BioTechniques13, 444–449.Morley AA (2014). 数字 PCR：简史.BiomolDetectQuantif. 1(1):1-2.Quan PL et al. (2018).dPCR: A Technology Review. Sensors (巴塞尔). 18(4):1271.