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实用哺乳动物细胞培养手册(六)-资讯wiki版
缓冲系统大多数细胞所需 pH 在 7.2 - 7.4。但是,细胞培养最适 pH 值随培养的细胞种类不同而 不同。成纤维细胞喜欢较高 pH (7.4 - 7.7), 而传代转化细胞系则需要偏酸 pH (7.0 - 7.4)。 由于多数培养液靠碳酸氢钠(NaHCO3)与 CO2 体系进行缓冲,因此,气相中的 CO2 浓度 应与培养液中碳酸氢钠浓度相平衡。如果气相或培养箱空气中 CO2 浓度设定在 5%,培养液中 NaHCO3 的加入量为 1.97g/L;如果 CO2 浓度维持在 10%,培养液中 NaHCO3 的加入量为 3.95g/L。细胞培养瓶盖不应拧得太紧,以保证气体交换。HEPES 是一种非离子缓冲液,在 pH 7.2 - 7.4 范围内具有较好的缓冲能力,但是非 常昂贵,在高浓度时对一些细胞可能有毒。HEPES 缓冲液可与低水平的碳酸钠(0.34g/L) 共用,以抵消因额外加入 HEPES 引起的渗......阅读全文 RNAi 实验介绍

1. RNAi 介绍 RNA 干扰(RNAi:RNA interference)是由诺贝尔生理学/医学奖得主 Andrew Z. Fire 和 Craig C. Mello(1)在线虫实验中发现的,2001 年 Elbashir 等人发现哺乳类的 siRNA 可以进行 RNAi 诱导

利用 Polybrene 进行 DNA 转染实验

实验材料 指数生长的哺乳动物细胞试剂、试剂盒 DMSO(30%) 含血清培养基Giemsa 染液甲醇Polybrene丁酸钠要转染的 DNA仪器、耗材 最低基础培养基组织培养皿实验步骤 材料缓冲液与溶液贮存液、缓冲液与试剂的成分见附录 1。稀释贮存液至所需浓度。DMSO(30%)/含血清培养基第 3

从哺乳动物细胞中制备核和细胞质提取物

实验方法原理 实验材料 转瓶或单层培养的哺乳动物细胞(如HeLa细胞)试剂、试剂盒 PBS低渗缓冲液高盐缓冲液含1. 2 mol L KCl透析缓冲液液氮仪器、耗材 贝克曼 JS4. 2 转子或相当的转子50 mL 圆锥形刻度聚丙烯离心管(对较小体积的提取物也可用 15 mL 的离心管)Doun

细胞和亚细胞提取物的制备实验4

方案4 氮舱减压法裂解培养细胞实验实验方法原理通过来自增压舱中的氮气减压膨胀来破碎细胞是一种快速、有效的细胞和组织的匀浆方法,能释放完整的细胞器和制备细胞膜(Hunter and Commerford,1961)。该方法的原理很简单:细胞放在一个压力舱中,在高压下(约5500kPa,相当于800ps

实用哺乳动物细胞培养手册(二)

消化液:分离组织和分散细胞。常用的有胰蛋白酶和二乙胺四乙酸二钠 (EDTA) 两种溶液。可以 单独使用,也可以混合使用。(1)胰蛋白酶溶液胰蛋白酶(简称胰酶)是一种黄白色粉末,易潮解,应放置冷暗干燥处保存。目前应用的胰蛋白酶主要来自牛或猪的胰腺。胰酶的主要作用是使细胞间的蛋白质水解,使细胞相

中国生物制药业两大突破口

生物制药(biopharmaceutical)是近二十年兴起的,以基因重组、单克隆技术为代表的新一代制药技术。与传统行业类似,生物制药产业也由研发、测试、上市销售三个阶段组成。但与传统化学药产业由大型药企所垄断不同,生物制药领域内的创业型企业借助技术基础不同形成的进入壁垒,异军突起,形成了以企业

CO2培养箱水套式和气套式的区别以及使用注意事项

1.基本信息二氧化碳培养箱是通过在培养箱箱体内模拟形成一个类似细胞/组织在生物体内的生长环境,培养箱要求稳定的温度(37°C)、稳定的CO2水平(5%)、恒定的酸碱度(pH值:7.2-7.4)、较高的相对饱和湿度(95%),来对细胞/组织进行体外培养的一种装置。 2.应用范围其广泛应用于细胞、组织培

二氧化碳培养箱的作用

1、二氧化碳培养箱能够对温度、二氧化碳浓度和湿度提供精确稳定的控制,以便于其研究工作的进展;2、二氧化碳培养箱能够对培养箱内的微生物污染进行有效的防范,并且能够定期消除污染,以保护研究成果,防止样品损失。二氧化碳培养箱广泛应用于细胞、组织培养和某些特殊微生物的培养,常见于细胞动力学研究、哺乳动物细胞

利用 Polybrene 进行 DNA 转染实验

下面讲述的 Polybrene 与 DMSO 转染的方法是 Aubin 等(1997) 方法的改进。利用此方法可以有效地将质粒 DNA 转染中国仓鼠卵巢细胞与角化细胞,产生的转化体比磷酸钙-DNA 沉淀物方法的多 15 倍。但是使用高分子量 DNA 时两种方法的转染效率无明显差别。本实验来源于分子克

LSCM细胞培养和转染

细胞培养和转染哺乳动物细胞按照标准的培养方法进行培养。在进行转染细胞前一天,按1∶4的比例,将培养的细胞铺在含有玻璃片的细胞培养皿中。第二天细胞将生长达50%的密度。在转染细胞后,继续培养1 ~ 2d,使得GFP标记的蛋白的表达水平达到能被

癌症耐药性是如何产生的?

近年来,研究者们在肿瘤的预防与治疗领域取得了突破性的进展,临床上手术、放化疗以及免疫疗法的结合使用也大幅提高了患者的寿命以及生活质。然而,在很多情况下,肿瘤组织还是会出现较强的抗药性,使得治疗结果往往不佳。因此,进一步探究癌细胞的耐药性的产生以及寻找针对性的治疗方法是目前的研究热点。本期为大家带

从哺乳动物细胞中制备核和细胞质提取物

核提取物的制备核提取物制备优化细胞质(S-100)组分的制备实验方法原理实验材料转瓶或单层培养的哺乳动物细胞(如HeLa细胞) &n

氮舱减压法裂解培养细胞实验

实验方法原理 通过来自增压舱中的氮气减压膨胀来破碎细胞是一种快速、有效的细胞和组织的匀浆方法,能释放完整的细胞器和制备细胞膜。该方法的原理很简单:细胞放在一个压力舱中,在高压下(约5500kPa,相当于800psi)氮气首先被溶解在细胞中,当压力突然消失时,氮从溶液中迅速气化,并引起细胞膜的拉伸和扩

摇床振幅和氧气传递效率的关系

摇床的振幅指托盘在做圆周运动时候的直径,有时候我们也叫\"振荡直径”或\"轨道直径”符号:Ø。作为标准,Infors提供振幅为3mm,25mm和50mm的摇床。什么是氧气传递效率(OTR)?氧气传递效率是指,氧气从大气中传入到液体中的效率。 OTR数值越高,氧传递效率越高。振幅和转速的影响这两个因素都会

什么是摇床的振幅?

摇床的振幅指托盘在做圆周运动时候的直径,有时候我们也叫\"振荡直径”或\"轨道直径”符号:Ø。RADOBIO提供振幅为3mm,25mm,26mm和50mm的标准摇床,同时可为客户提供其他尺寸振幅的定制摇床。什么是氧气传递效率(OTR)?氧气传递效率是指,氧气从大气中传入到液体中的效率。OTR

RNAi 实验介绍

1. RNAi 介绍RNA 干扰(RNAi:RNA interference)是由诺贝尔生理学/医学奖得主 Andrew Z. Fire 和 Craig C. Mello(1)在线虫实验中发现的,2001 年 Elbashir 等人发现哺乳类的 siRNA 可以进行 RNAi 诱导。这个方法与常规方

如何清理细胞培养箱的培养室

细胞培养箱是开展免疫学、肿瘤学、遗传学及生物工程所必须的关键设备,广泛应用于细胞、组织培养和某些特殊微生物的培养,常见于细胞动力学研究、哺乳动物细胞分泌物的收集、各种物理、化学因素的致癌或毒理效应、抗原的研究和生产、培养杂交瘤细胞生产抗体、体外授精(IVF)、干细胞、组织工程、药物筛选等研究领域。

纯化剪接因子SR蛋白实验

实验方法原理 前体 mRNA ( pre-mRNA ) 剪接因子 SR(serine/argininc rich,富含丝/苏氨酸)蛋白家族是将剪接体组装到前体 mRNA 上的重要

腺病毒系统使用指南(二)

2.2 rAAV shRNA克隆服务 Vigenebio为您提供了多种表达shRNA的rAAV,包括U6或H1启动子和作为哺乳动物表达标记的GFP或RFP。同时,也可根据您感兴趣的基因提供shRNA设计服务。2.3 rAAV载体容量腺相关病毒载体能够感染分裂和非分裂细胞。毒性和免疫原性低,适合以相对

二氧化碳培养箱的使用手册之温度控制

二氧化碳培养箱,是一款可在培养箱箱体内模拟形成类似细胞或组织,在生物体内生长环境的仪器设备。通常培养箱的稳定温度在37℃左右,CO2稳定水平在5%,恒定酸碱度为7.2-7.4,相对饱和湿度为95%。 目前,该仪器设备被广泛应用于细胞、组织培养和某些

细胞培养用血清中的纳米细菌和黑胶虫有关系么

引言芬兰科学家Ciftcioglu et al进行哺乳动物细胞培养时发现细胞内存在一种原核微生物,能通过100 nm的滤菌器,Kajander将其命名为纳米细菌(nanobacteria)。纳米细菌广泛存在于自然界的矿物质中和生物体内,能感染人类、牛、鹿和其它哺乳动物,是一种人畜共患的致病原。纳米细

检测实验室的实验用水知识大全

水的基本性质 •1个水分子(H2O)是由1个氧原子和2个氢原子弯曲键结而成。由于正、负电荷的中心不一致,因此属于极性分子。当2个水分子同时存在时,二者会由静电交互作用与氢键结合,互相吸引并保持一定的距离。而1个水分子可以同时与4个水分子结合,形成晶体般的整齐结构。 •水分子聚合体中,由于氢键

实验室用水知识大全

▼水中存在的杂质 •可溶性无机物:无机盐类、溶解气体、重金属、硬度成分(钙、镁等) •可溶性有机物:木质素、单宁、腐植酸、内毒素、RNA分解酶、农药、三氯甲烷、环境荷尔蒙物质、界面活性剂、有机溶剂 •微粒子:铁锈、胶体、悬浮物、固体颗粒 •微生物:细菌类、藻类▼实验用水所要求的纯度 所谓实

哺乳动物细胞抽提物中荧光素酶的测定实验

实验材料 用感兴趣的 DNA 转染的哺乳动物培养细胞试剂、试剂盒 细胞裂解缓冲液荧光素酶测定缓冲液荧光素溶液不含钙盐和镁盐的磷酸盐缓冲液仪器、耗材 荧光光度计和光度计测置管橡胶棒实验步骤 材料缓冲液和溶液贮存液稀释到适当浓度。细胞裂解缓冲液25 mmol/L 双甘氨肽(pH7.8)15 mmol/L

氮舱减压法裂解培养细胞实验

实验方法原理通过来自增压舱中的氮气减压膨胀来破碎细胞是一种快速、有效的细胞和组织的匀浆方法,能释放完整的细胞器和制备细胞膜。该方法的原理很简单:细胞放在一个压力舱中,在高压下(约5500kPa,相当于800psi)氮气首先被溶解在细胞中,当压力突然消失时,氮从溶液中迅速气化,并引起细胞膜的拉伸和扩展

专访中科院惠利健 人源性人工肝入选年度十大医学进展

当婴儿呱呱坠地、胚胎干细胞分化为成体细胞的那一刻,多数细胞的功能和命运似乎被定格,并开启了不可逆的时钟发条。然而肿瘤组织中层出不穷的基因突变和永生化癌细胞,却以最惨烈的方式昭示着细胞命运的其他可能。随着克隆技术和人工诱导多能干细胞的出现,改写细胞命运的传奇更走入了再生医学和肿瘤研究的聚光灯下。

用蛋白酶K和苯酚从哺乳动物细胞中分离高分子质量DNA

这一程序改自最先由 Daryl Stafford 及其同事描述的方法(Blin and Stanfford 1976)。 当需要大量哺乳动物 DNA,如用于 Somhern 杂交或者用噬菌体 λ 载体构建基因组文库时,应选用这一方法。从 5X107培养的非整倍体细胞 ( 如 HeLa 细

血清替代品:XerumFree XF205培养基添加物使用说明(二)

实验步骤A) 用足够的细胞贴壁因子包被细胞培养容器表面。--一些商用的包被试剂如PronectinTM F, MapTRIXTM或同等的其它产品--纤连蛋白或多聚赖氨酸或其它--少量FBS(如对于T25烧瓶添加500ul) 37℃孵育过夜,随后用新鲜培养基或PBS洗两遍。--利于细胞贴壁的一种即用型