qa-bio去糖基化试剂盒QA-Bio提供易于使用的去糖基化试剂盒，可在天然和变性条件下从糖蛋白中去除N-连接和O-连接的聚糖。PNGase F通常用于在变性和天然条件下都只对含有N-连接聚糖的糖蛋白进行去糖基化。对于被PNGase F缓慢裂解的天然样品或在PNGase F消化后沉淀的天然样品，建议使用我们的Endo F Multi-Kit。两种方法均能使聚糖完整无损，并可供进一步分析。如果聚糖类型未知，或者同时包含N-和O-聚糖，则建议使用我们的Enzymatic CarboRelease Kit或Enzymatic DeGlycoMx Kit。这些去糖基化试剂盒包括许多酶，这些酶会去除聚糖并将其消化成单糖。在DeglycoMx试剂盒中，酶以预混合的酶混合物的形式包装在一个20升的小瓶中。对于CarboRelease试剂盒，酶分别在20微升的小瓶中单独提供，从而在测定设计中具有更大的灵活性。LudgerLiberate水解酶解试剂盒包含用于从糖蛋白生物制药中释放N和O联聚糖的试剂。释放的聚糖具有自由的还原末端，可以通过还原胺化进行荧光标记。释放条件可以针对N-聚糖，O-聚糖或N-和O-聚糖两者的释放进行优化。对于释放和回收O-连接的聚糖，我们建议使用Ludger Orela试剂盒。酶促碳释放试剂盒该试剂盒包括使糖蛋白去糖基化，去除所有N-连接的寡糖和许多O-连接的糖所需的酶和缓冲液。的酶被分别包装在单独的20微升小瓶中。与我们的酶混合物KE-DGMX相比，这使研究人员可以灵活地更充分地表征与其糖蛋白相连的聚糖。零件编号：KE-DG01单个糖苷酶的适当使用可以确定唾液酸化（仅使用唾液酸酶）和N-连接聚糖（仅使用PNGase F）和O-连接聚糖（使用唾液酸酶， -半乳糖苷酶，O-糖苷酶和葡萄糖苷酶）的特定存在）。或者，QA-Bio在我们的DeGlycoMx试剂盒（KE-DGMX）中的一个20升小瓶中产生酶的预混合溶液。包括以下每种酶的20微升：PNGase F（脑膜炎杆菌）O-糖苷酶（肺炎链球菌）唾液酸酶（脲节杆菌） -半乳糖苷酶（肺炎链球菌）葡萄糖苷酶（肺炎链球菌）其他提供的试剂：反应缓冲液变性溶液海卫一牛胎球蛋白（对照）特异性CarboRelease酶试剂盒将糖蛋白去糖基化，从糖蛋白中去除所有N-连接的寡糖和许多O-连接的寡糖。使用酶PNGase F去除N-连接（天冬氨酸连接）。此外，所有丝氨酸或苏氨酸连接（O连接）Gal-（b1-3）-GalNAc-（a1）和所有唾液酸取代的Gal-（ b1-3）-GalNAc-（a1）将使用唾液酸酶和O-糖苷酶的组合去除。 -半乳糖苷酶和葡糖胺苷酶的加入将有助于较大的O-链结构的去糖基化。试剂盒容量方案中推荐的酶量足以在给定时间内将约100 g的平均糖蛋白去糖基化。PNGase F裂解通常是限速反应，这是由于缓慢清除一些空间受阻的N连接残基，即使糖蛋白变性也是如此。由于所有酶在反应条件下都可以保留几天的活性，因此，如果延长孵育时间，则大量的糖蛋白可能会被去糖基化。相反，如果裂解的糖蛋白量远小于100 g，则无需使用推荐量的酶。可以将这些酶稀释到1X反应缓冲液7中。它们将在4 C下以稀释形式保持稳定。牛胎球蛋白控制蛋白牛胎球蛋白包含唾液酸化的N和O连接寡糖13。注意：胎球蛋白的商业制剂中包含的蛋白酶会终降解该蛋白。Fetuin Control已在90 C热处理10分钟，以使蛋白酶失活。Fetuin溶液可以在4℃下保存。变性方案1.在Eppendorf管中的30 µL去离子水中溶解100 µg或更少的糖蛋白。2.加入10 L5X反应缓冲液7和2.5 L变性溶液。轻轻混合。3.在100 C加热5分钟。注意：与SDS一起加热时，某些蛋白质可能会沉淀。在这种情况下，请省略热处理，并在添加酶后将孵育时间延长至24小时。4.冷却至室温。加入2.5 lTriton X-100溶液。轻轻混合。注意：未添加Triton X-100可能会导致某些酶的活性降低。5.每种酶各添加1 L。6.在37 C下孵育3小时。
7.按选择的方法进行分析。或者，可以单独或顺序添加酶，以确定糖蛋白上存在何种类型的寡糖。非变性方案1.在Eppendorf管中的35 L去离子水中溶解100 g或更少的糖蛋白。2.添加10 L5X反应缓冲液7。3
.添加1 L每种酶。
4.在37 C下孵育1-5天。应使用变性方案将等分试样去糖基化，以提供完全去糖基化蛋白质的凝胶标准品。然后可以将天然蛋白质的位置与此标准品进行比较，以判断去糖基化的程度。 关注本网官方微信 随时阅读专业资讯