Matchmaker? Gold Yeast Two-Hybrid System 630489 1Set - clontech - 网上商城 - 苏州蚂蚁淘生物科技有限公司ShangHai Rebiosci Biotech Co.,Ltd-蚂蚁淘生物

苏州蚂蚁淘生物科技有限公司SuZhouebiomall BIOLOGicalTechnologyCo.,Ltd.成立于2017年，经过数年的努力已迅速成为集科研和生产为一体的专业化生物工程公司。特别是ELISA研发，代测，技术服务这一产品已使上海抚生成为中国知名公司。公司产品涵盖ELISA研发、细胞培养，各种生化试剂、各种酶类、分子生物学试剂盒、培养基、自产实验室耗材、小型仪器等。此外、上海抚生还代理了美国药典标准品，中检所标准品，sigma,ScienCell,ATCC,wak0,omega，Worthington、MBI、Bioworld、Calendon等国外各类知名公司的产品。上海抚生将进一步加强人才经营、产品经营，不断提升企业的核心竟争力，实现具有高科技产业体系、知识化创业团队的国际化的公司，服务于生命科学领域，迎接世界经济一体化所带来的机遇与挑战。

如何通过Chromotek公司GFP-Trap如何设计成功的IP实验？使用ChromoTekGFP-Trap®时如何计划GFP融合蛋白的免疫沉淀序言本文档提供有关如何应用ChromoTekGFP-Trap®进行免疫沉淀的实用信息。简介ChromoTekGFP-Trap®基于源自羊驼单可变域抗体（也称为VHH或纳米抗体）的GFP结合蛋白（图1）。当应用于免疫沉淀时，GFP-Trap具有特殊的性能，并提供了优于传统IgG抗体的一些优势。 $\"\\\"Chromotek：使用GFP-Trap®如何设计成功的IP实验\\\"\"$ 实验计划在计划使用ChromoTekGFP-Trap®进行感兴趣的GFP融合蛋白的免疫沉淀时，应考虑一些实验方面。下面，我们指导您完成每个步骤。共有3种矩阵：

特征	琼脂糖珠	磁性琼脂糖珠	磁珠
矩阵	琼脂糖，4％高度交联	琼脂糖，6％交联	无孔二氧化硅
颗粒尺寸	45-165微米	20-40微米	0.5-1微米
装订能力	每10μl珠浆2-3μg	每10μl珠浆2-3μg	每10μl珠浆0.5μg
磁性	没有	是	是

预清除：预清除是除去与固相支持物非特异性结合的蛋白质或DNA的可选步骤。它包括在用GFP-Trap进行实际的免疫沉淀实验之前，将细胞提取物与普通珠子（例如结合对照琼脂糖珠子）一起孵育。在成功进行预清除后，非特异性蛋白质或其他成分将不会与目标蛋白质共同纯化。CRAPome：从本质上讲，每个基质和结合分子都可能非特异性地结合某些蛋白质，从而导致蛋白质背景。科学家们在www.crapome.org上建立了基于互联网的数据库CRAPome。该数据库存储并标注了蛋白质组学研究社区生成的阴性对照。CRAPome有助于确定背景污染物，例如与固相支持物，亲和试剂或表位标签相互作用的蛋白质。特异性-GFP-Trap®捕获哪些荧光蛋白GFP-Trap®与大多数常见的GFP衍生物特异性结合：

荧光蛋白	GFP-Trap®		荧光蛋白	GFP-Trap®
（e）绿色荧光蛋白	√	（e）柠檬黄	√
标签GFP2	√	荧光蛋白	√
涡轮绿色荧光蛋白	--	超级文件夹GFP	√
三叶草	√	微蓝藻	√
YFP	√	pH值	√
CFP	√	GFP S65T	√
金星	√	--	--

ChromoTekGFP-Trap®仅结合正确折叠的活性GFP。据信这是因为纳米抗体结合了GFP的三维表位。纳米抗体细长的CDR3（互补决定区3）可进入蛋白质的裂口和酶促中心，这是常规抗体无法接近的，但会导致该GFP纳米抗体具有非常强的结合力和非常低的解离常数。因此，抗GFP纳米抗体不适用于蛋白质印迹中的蛋白质检测。对于GFP（融合蛋白）的Western印迹检测，ChromoTek建议使用传统抗体抗GFP抗体3H9（大鼠单克隆抗体，请参阅互补产品）。对照-我应该采取哪些对照来验证实验数据？下面根据应用找到一些建议：对于免疫沉淀（IP）：•用于GFP融合物IP的GFP-Trap®和不相关的Nano-Trap作为阴性对照，例如Myc-Trap®，GST-Trap或MBP-Trap对于蛋白质复合物AB的免疫共沉淀（Co-IP）：细胞裂解–准备细胞裂解液时要考虑什么？裂解缓冲液：•非变性裂解缓冲液适用于Co-IP，因为蛋白质将保持其天然构象•RIPA（放射免疫沉淀测定）缓冲液可能会使蛋白质变性或破坏蛋白质复合物抑制剂：•添加蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解！•保留蛋白质的翻译后修饰，并添加例如磷酸酶抑制剂！•通过将样品放在冰上来防止蛋白质降解！免疫沉淀– GFP融合蛋白的结合由于GFP结合蛋白与珠子表面共价偶联，因此GFP-Trap®珠子即可使用，可以直接添加到制备的裂解物中。GFP纳米抗体的亲和力在皮摩尔范围内，因此GFP融合蛋白的消耗可以在5到30分钟内完成。GFP-Trap®的缓冲液兼容性，可用于结合和洗涤GFP-Trap®与大多数洗涤缓冲液兼容，并在恶劣条件下稳定，包括：•最高1 M NaCl和8 M尿素•最高0.2％SDS和2％NP -40洗脱策略用竞争性肽代替GFP融合蛋白洗脱结合的GFP融合蛋白无效。此外，由于GFP-Trap®在变性条件下起作用，因此添加诸如尿素的离液化合物不会使GFP-融合蛋白键化。因此，我们建议用以下方法洗脱：•SDS（例如SDS样品缓冲液）是洗脱结合的GFP标签蛋白的非常有效的方法。洗脱导致变性的GFP融合物。•0.2 M pH值为2.5的甘氨酸可选地，您可以使用pH 2.5的甘氨酸洗脱。建议重复此洗脱步骤，因为pH转换洗脱不能完全起作用。重复将提高洗脱效率。非常重要：洗脱后不要忘记立即中和蛋白质！作为上述洗脱选择的替代方法，可以引入GFP与融合蛋白之间的蛋白酶切割位点。如果结合了不稳定的蛋白质或想要富集感兴趣的天然蛋白质，则建议使用此选项。此外，考虑您是否真的需要从微珠上洗脱目标结合蛋白，而不是在\"微珠”上进行下游分析：•仍与微珠偶联时可以消化蛋白质，以进行后续的质谱分析。•如果未阻断活性中心，则仍可与磁珠偶联时可以进行酶活性测定。可重复性GFP-Trap®是一条细小，可溶性和稳定的单多肽链，可在细菌中重组表达。这与质量控制相结合，使其生产稳定且可重复生产，从而获得可靠的结果。介绍纳米抗体及其应用的精选参考文献：纳米抗体作为体外和细胞内蛋白质动力学探针的Dmitriev，OY，Lutsenko，S.和Muyldermans，S.在：生物化学杂志，2015 – jbc-R115。使用荧光融合蛋白进行生化和功能研究的多功能纳米阱Rothbauer，U.，Zolghadr，K.，Muyldermans，S.，Schepers，A.，Cardoso，MC，Leonhardt，H. in：Mol Cell Proteomics，2008 Feb; 7 （2）：282-9。EPUB 2007年10月21日基于纳米抗体的产品作为研究和诊断工具De Meyer，T.，Muyldermans，S。和Depicker，A .：《生物技术趋势》，2014年5月；32（5）：263-270;用于免疫亲和纯化和免疫灌注色谱的单域抗体片段的有益特性Verheesen P.，Ten Haaft MR，Lindner N.，Verrips CT，de Haard JJW in：Biochim。生物物理学。Acta，2003；1624（1-3）：21-28一种用于活细胞单分子成像的高特异性金纳米探针Leduc，C.，Si，S.，Gautier，J.，Soto-Ribeiro，M.，Wehrle-Haller，B.，Gautreau，A.，.Giannone， G.，Cognet，L.＆Lounis，B.，in：纳米字母，2013：13（4），1489-1494。基于纳米抗体的染色质免疫沉淀。DUC，TN，Hassanzadeh-Ghassabeh，G.，Saerens，D.，Peeters的，E.，沙利耶，D.，＆Muyldermans，S.在：单结构域抗体：方法和协议，2013：491-505

产品名称	尺寸	码
GFP-Trap®A▶偶联琼脂糖珠	10 rxns（250µl树脂）	GTA-10
20 rxns（500µl树脂）	GTA-20
100 rxns（2.5毫升树脂）	GTA-100
200 rxns（5ml树脂）	GTA-200
400 rxns（10毫升树脂）	GTA-400
GFP-Trap®A试剂盒▶GFP-Trap®A▶包括裂解液和洗脱缓冲液	20 rxns（500µl树脂）	gtak-20
GFP-Trap®MA▶偶联到琼脂糖磁珠上	10 rxns（250µl树脂）	gtma-10
20 rxns（500µl树脂）	gtma-20
100 rxns（2.5毫升树脂）	gtma-100
200 rxns（5ml树脂）	gtma-200
400 rxns（10毫升树脂）	gtma-400
GFP-Trap®MA试剂盒▶GFP-Trap®MA▶包括裂解液，洗涤液和洗脱液	20 rxns（500µl树脂）	gtmak-20
GFP-Trap®M▶耦合到磁性颗粒	10 rxns（250µl树脂）	gtm-10
20 rxns（500µl树脂）	gtm-20
100 rxns（2.5毫升树脂）	gtm-100
200 rxns（5ml树脂）	GTM-200
400 rxns（10毫升树脂）	gtm-400
GFP-Trap®M试剂盒▶GFP-Trap®M▶包括裂解液，洗涤液和洗脱液	20 rxns（500µl树脂）	gtmk-20
GFP- MultiTrap®▶黑色96孔板	96 rxns（1个板）	gtp-96
480 rxns（5个板）	gtp-480
GFP-Trap®▶解偶联蛋白	250微升	gt-250
旋转柱	10台	sct-10
20伙	sct-20
50单位	sct-50
绑定控制▶琼脂糖珠	500µl（20 rxns）	婴儿20
结合控制▶磁性琼脂糖珠	500µl（20 rxns）	单克隆抗体20
装订控制▶磁性粒子	500µl（20 rxns）	bmp-20
GFP抗体（3H9）▶大鼠单克隆	100微升	3H9

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ChromoTek Nano-Traps通常用于pulldown目的蛋白及其与细胞提取物、细胞器的相互作用物。这些重组结合蛋白适用于快速、可靠、高效的分析以及为下游应用制备一步纯化蛋白等。Nano-Traps采用的抗体是基于alpaca的单域抗体片段(VHHS);具有分子量小(15Kda)、极端稳定(70℃仍保持稳定)，高亲和力(高特异性性结合GFP蛋白)，无普通抗体轻链与重链污染等一系列优点等优点;GFP抗体可以特异性结合绿色荧光蛋白的衍生物，如eGFP, wtGFP, GFP S65T，TagGFP，不与RFP衍生蛋白结合。

1. 产品类型：

蛋白质/肽标签

GFP-Trap 绿色荧光蛋白偶联系列

RFP-Trap 红色荧光蛋白偶联系列

Myc-Trap Myc标签偶联系列

GST-Trap GST标签偶联系列

MBP-Trap - NEW MBP标签偶联系列-新

特异性蛋白

Dnmt1-Trap Dnmt1偶联系列

Mdm4/ HdmX-Trap Mdm4/ HdmX偶联系列

MK2-Trap MK2偶联系列

p53 N-term-Trap p53 N-term偶联系列

p53 C-term-Trap p53 C-term偶联系列

PARP1-Trap PARP1偶联系列

Binding controls Binding control agarose beads 琼脂糖珠

Binding control magnetic agarose beads 磁性琼脂糖珠

Binding control magnetic particles 磁粉

2. 产品应用

免疫沉淀/共沉淀

质谱分析

酶活力检测

ChIP/RIP分析

3. 产品优点

对下游凝胶和质谱分析无重轻链污染

亲和力吸附作用极高

孵育时间短

超过1000篇相关文献报道

满足抗体验证的最高要求：结构和功能特征

ChromoTek F2H® 分析系列

采用荧光双杂交(F2H®)技术在常规荧光显微镜下来研究哺乳动物细胞中蛋白质与蛋白质的相互作用，是一种快速而简便的方式。对于高通量分析(HCA)和PPI抑制剂筛选，直接用肉眼读出是最佳方式。

1. 产品类型

F2H®-Kit Basic

F2H®-Kits p53-Mdm2/4

F2H®-Kit Androgen Receptor

2. 产品应用

在细胞内环境可视化及验证蛋白质-蛋白质相互作用

利用荧光成像支持生化PPI分析

识别相互作用的蛋白质结构域

监测PPI细胞在治疗后的动态，确定抑制动力学

筛选抑制或激活蛋白质-蛋白质相互作用的化合物

3. 产品优点

快速、便捷

可逆性结合使抑制剂/激动剂化合物的筛选和动力学的测定成为可能

只需要一个传统的荧光显微镜和任何的GFP和RFP融合蛋白。

苏州蚂蚁淘生物科技有限公司是专业从事生物技术产品销售的高科技企业，是国内生物试剂、仪器、消耗品领域的知名企业之一。起发公司自成立以来，连续2年高速成长。公司的发展目标是建成专业从事生物技术产品销售、生产与开发的一流公司。

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