主页工具和资源故障排除指南NEBNext® RNA 文库制备试剂盒故障排除指南（NEB #E7760、E7765、E7770、E7775、E7420、E7530）NEBNext® RNA 文库制备试剂盒故障排除指南（NEB #E7760、E7765、E7770、E7775、E7420、E753 0)可能的观察原因影响建议的解决方案存在生物分析仪峰 <85 bp（图 1）• 存在 PCR 清理后残留的引物引物不能聚集或测序，但可以结合流动池并降低簇密度• 使用 1.0XAMPure 珠再次清理 PCR（第二次清理可能导致文库产量降低）存在 127 bp 适配器/二聚体生物分析仪峰（图 1）• 添加未稀释的接头• RNA 输入太低• RNA 过度片段化或在片段化过程中丢失• 低效连接接头-二聚体将聚集并被测序。如果与文库相比比率较低，可能不是问题，但有些读数会成为二聚体。• 在设置连接反应之前稀释接头（10 倍稀释）•使用 1.0XAMPure 珠子再次清理 PCR（第二次清理可能导致文库产量降低）。存在分子量高于预期文库大小（~1,000 bp）的其他生物分析仪峰（图 2）• PCR 伪影（过度扩增）。代表具有自身特征的单链文库产物-退火。如果PCR循环数（或PCR输入量）太高；在 PCR 的后期循环中，引物变得有限。因此，片段两端的接头序列相互退火。这会产生具有不同插入大小的分子，这些分子在生物分析仪中运行速度较慢。如果与文库相比比率较低，则可能不是测序的问题 • 减少 PCR 循环次数。广泛的文库大小分布（图 3）• RNA 文库大小的低片段化将包含更长的插入片段• 增加 RNA 片段化时间 图 1 图 2 53775a88f8&哈希=FA7BD689C5FBEC66B69E04D4AD1AB0A8\"> 图 3