背景：Etirinotecan pegol (EP)为一种独特的拓扑异构酶1抑制剂，可促进对SN38的持续接触。转移性乳腺癌(mBC)患者通过EP可获得29%的总缓解率，在此基础上又针对mBC患者进行了一项全球性临床III期BEACON试验。借助于患者血样中的循环肿瘤细胞(CTC)这一最低侵袭性的方式，可实现对与药物活性相关的药效学(PD) 标记物进行检测。本研究针对在治疗前后分离到的CTC建立了多元定量免疫荧光分析方法，从而实现了对与EP相关的靶点特异性PD标记物进行检测。

方法：通过对照组(0.1% DMSO)及给药组(SN38, 10 uM)肿瘤细胞系(HCT116、 MCF7、 A549、SKBr3)及健康供体的PBMC，本研究建立了针对Top1、Top2、g-H2Ax、Rad51、ABCG2及Ki-67的分析方法。随后，在针对细胞角蛋白、CD45及DAPI抗体标记的孔板上，对各生物标记物的最适抗体进行了多元分析，从而对CTC进行表型鉴定。在针对BEACON患者进行的分析中，抽取到的7.5 mL系列全血样本按Apocell (德克萨斯州，休斯顿市)条件进行运输，以进行进一步处理。按ApoStream 技术，对PBMC和CTC进行分离处理。对 CTC 进行 PD 标记物染色处理，并借助配备有图像分析软件的iCys 激光扫描血细胞计数仪进行了分析。

结果：结合至肿瘤细胞的抗体表明，染色仅局限于细胞核区(Top1、Top2、g-H2AX、Ki-67)或细胞膜区(ABCG2)，根据峰距可实现对其同型对照物进行区分，相关信号强度与细胞标记物表达水平的高低情况有关。目前，约80%的BEACON患者同意参加CTC子研究。截至2012年12月，已获取到了167份BEACON患者给药前血样数据。99% 的血样已得到成功处理。93%的样本可检测到CTC，中位CTC数目为216个(范围：7.5-14816个)。Top1、Top2、 g-H2Ax、Rad51、ABCG2及Ki-67染色结果呈阳性的比例分别为82%、 89%、16%、53%、 31%及52%。

结论：对于从参与BEACON 试验的患者分离到的CTC，可实现对EP靶点特异性药效生物标记物的有效测定。治疗前后样本的收集与分析工作仍在进行中。本研究临床试验信息：NCT01492101