多克隆 AffiniPure-VHH™ 二抗放大细节

用于高分辨率免疫染色的新型 VHH 片段抗体

了解更多Whole IgG Affinity-Purified Secondary Antibodies

\"我使用了多种二抗，Jackson ImmunoResearch 一直是最好的。荧光团明亮且稳定，其选择性（x 反应性已去除) 二级标记总是在多重标记中显示出物种特异性。”

Janet Duerr，俄亥俄大学

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VHH Discovery二抗首页 /技术中心 /产品选择与使用 /VHH Discovery二抗技术服务：tech@jacksonimmuno.comVHH Discovery二抗概述

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Western blot检测IgG亚类Monitor IgG 2+3 subclass理想时间 PBMC 收获的滴度检测生物样品中的 VHH 抗羊驼 IgG 二抗

骆驼（羊驼、美洲驼、骆驼、骆马和原驼）除了常规 IgG1 之外还产生两种非经典免疫球蛋白。 IgG2 和 IgG3 被称为仅重链（或重链）抗体。它们具有单结构域结合位点 (VHH)，并且不包含 CH1 结构域或轻链。 VHH 抗体具有易于处理的特性，使其可用于多种医学应用，例如癌症诊断和治疗。

阅读更多关于非规范免疫的信息骆驼物种中的球蛋白。

JIR 开发了抗羊驼 IgG、亚类和 VHH 结构域二抗，以优化 VHH（单结构域）抗体的开发和应用。

下载 VHH 发现手册浏览抗羊驼 VHH 二抗

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重组 VHH 抗体开发的途径

高亲和力 VHH 抗体的开发遵循上面显示的公认途径。

JIR 抗羊驼抗体可在特定阶段用于加速和增强高亲和力 VHH 抗体的开发。

发现高质量 VHH 候选物的成功和速度取决于每一步所用工具的保真度和实用性。

浏览抗羊驼 IgG、亚类和 VHH 结构域二抗

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Western blot检测IgG亚类

Jackson ImmunoResearch Anti-Alpaca IgG (H+L) and Anti-Alpaca IgG，子类 2+3 适用于检测羊驼和美洲驼 IgG。

图 1 和图 2 详细说明了通过蛋白质印迹检测这两个物种的 IgG 亚类。使用 Maass 等人的方法从血清中纯化 IgG 亚类。 (2007) 在非还原条件下通过 SDS/PAGE 分离。如所示用二抗探测印迹。

羊驼IgG亚类检测图1：羊驼IgG亚类检测通过蛋白质印迹。 A 组，过氧化物酶亲和山羊抗羊驼 IgG (H+L) 128-035-003 B 组，过氧化物酶亲和山羊抗羊驼 IgG (H+L)（最小 X Bov、Hu、Ms、Rb、Rat Sr Prot） 128-035-160 C 组，过氧化物酶亲和山羊抗羊驼 IgG，亚类 2+3 特异性（最小 X Bov、Hu、Ms、Rb、Rat Sr Prot）128-035-229.美洲驼 IgG 亚类的检测 图 2：通过蛋白质印迹检测美洲驼 IgG 亚类。图 D，过氧化物酶亲和山羊抗羊驼 IgG (H+L) 128-035-003 图 E，过氧化物酶亲和山羊抗羊驼 IgG（H+L )(min X Bov, Hu, Ms, Rb, Rat Sr Prot) 128-035-160 Panel F, Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Alpaca IgG, subclasses 2+3 specific (min X Bov, Hu, Ms, Rb, Rat Sr Prot) Prot) 128-035-229。

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监测 IgG 2+3 亚类滴度以理想地确定 PBMC 收获时间

可以通过用感兴趣的蛋白质对羊驼或美洲驼进行免疫来启动工程化 VHH 抗体的开发。免疫反应使研究人员能够在最佳时间收获 PBMC，在体内成熟后产生多种特异性。

JIR 抗羊驼二抗可用于区分总 IgG 和重抗体免疫方案期间骆驼血清中的链抗体。重链（亚类 2 和 3）抗体反应可能与总抗体反应成熟不同IgG 和产生 VHH（来自重链抗体）的 PBMC 的收获可以优化。

可以通过 ELISA 或流式细胞术/FACS 监测血清转化（抗原特异性抗体滴度）（Pardon 等人，2014 年）。 JIR 抗羊驼 IgG (H+L) 可用于监测免疫前和免疫后血清转化。 JIR Anti-Alpaca IgG 2+3 非常适合测量重链抗体血清转化，以实现用于 VHH 文库构建的 PBMC 收获的最佳时机。

图 3 显示重链抗体的产生可能无法通过总 IgG 读数来预测。用感兴趣的蛋白质免疫后，ELISA 用于表征特异性抗体反应。将感兴趣的蛋白质包被到ELISA板上，抗血清用作一抗来源，过氧化物酶偶联的二抗128-035-160或分别用于检测总IgG或IgG 2+3 。总 IgG 滴度可能表明收获点为 150 天，但 IgG2 和d 3 反应直到免疫接种后300天后才最佳。

图 3a：血清转化动力学。产品 128-035-160 和 128-035-229 用于测量典型免疫过程中羊驼血清中的抗原特异性抗体滴度。 图 3b：IgG 2+3 的百分比通过 ELISA 与总 IgG 进行比较。

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检测生物样品中的VHH

在VHH开发的筛选阶段以及下游应用中可能需要检测。使用 VHH 特异性二抗直接检测，而不是通过添加到 VHH 的 N 或 C 末端的标签，可以在许多应用中提供优势。例如，使用抗 VHH 结构域抗体可通过纯化标签（如 His6）规避检测，从而减少来自 endog 的背景enous 蛋白与标签表位具有同源性。在蛋白质印迹中，抗羊驼 VHH 抗体能够在存在其他蛋白质的情况下靶向检测 rVHH。当检测来自细胞培养基或细胞裂解物的重组蛋白时，与抗 His6 抗体相比，抗羊驼 VHH 抗体显示出明显更少的非特异性检测（图 4）。

筛选或量化 VHH 的能力纯化前表达可加快发现和生产。然而，VHH 相对于细胞裂解物中总蛋白的量可能非常小，因此难以进行可靠的表征。通过靶向 VHH 结构域，山羊抗羊驼 IgG VHH 结构域抗体消除了猜测或标记的需要。如图 5 所示，这些多克隆抗体能够以高灵敏度和特异性检测细胞裂解物中的 VHH。

下载抗 VHH 手册图 4：Western blot 比较大肠杆菌裂解物中目标蛋白的检测。大肠杆菌裂解物蛋白在还原条件下通过 PAGE 分离并转移到硝化纤维素上。印迹被 BSA 封闭（ 001-000-162) 并用 HRP 偶联的抗 His6 抗体或 HRP 偶联的山羊抗羊驼 VHH (128-035-232) 以 1:5k 稀释进行探测。使用 ECL 进行检测，同时对印迹进行成像泳道 1. 仅 20 µg 大肠杆菌提取物 泳道 2. 20 µg 大肠杆菌提取物，rVHH 表达占总蛋白的 5% (1 µg) 泳道 3. 20 µg 大肠杆菌提取物，rVHH 表达占总蛋白的 1% (0.2 µg)图 5：夹心 ELISA 显示大肠杆菌蛋白裂解物中 rVHH 分析物的检测。AffiniPure 山羊抗羊驼 VHH (128-005-232) 被涂在 ELISA 板上作为捕获 a抗体，然后连续稀释纯 rVHH 标准品或含有 rVHH 分析物的大肠杆菌裂解物，占总蛋白的 1% 或 5%。用 HRP 偶联的山羊抗羊驼 VHH (128-035-232) 和 TMB 底物检测 rVHH。

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抗羊驼 IgG 二抗JIR 的抗羊驼抗体可识别羊驼和美洲驼 IgG (H+L)、亚类 2+3 或 VHH 结构域。二抗CodeGoat Anti-Alpaca IgG (H+L)*128-005-003Goat Anti-Alpaca IgG (H+L) (min X Bov, Hu, Ms, Rb, Rat Sr Prot)*128-005-160Goat Anti-Alpaca IgG，亚类 2+3 特异性（最小 X Bov、Hu、Ms、Rb、Rat Sr Prot）*128-005-229山羊抗羊驼 IgG，VHH 结构域（最小 X Bov Sr Prot）128-005-232山羊抗羊驼IgG、VHH 结构域（最小 X Bov、Hu、Ms、Rb、Rat Sr Prot）128-005-230

* 这些抗体主要与 Fc 区反应，不推荐用于检测 VHH 抗体（纳米抗体†） .

偶联选项未偶联辣根过氧化物酶碱性磷酸酶生物素-SPDyLight™ 405Alexa Fluor® 488FITCCy™ 3Alexa Fluor® 594Rhodamine Red-X™Alexa Fluor® 647Cy™ 5Browse 抗羊驼 IgG、亚类和 VHH 结构域二抗

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†纳米抗体和纳米抗体是 Ablynx N.V. 的注册商标。AffiniPure™ 是 Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc 的商标.DyLight™ 荧光染料是 Thermo Fisher Scientific 的商标。Cy™ 是 GE Healthcare 的注册商标。Rhodamine Red™-X 是 Invitrogen 的商标。Alexa Fluor® 是 Life Technologies Corp. 的商标。 Top ×

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