免疫组织化学 (IHC)/ 免疫细胞化学 (ICC)

免疫组织化学 (IHC)/ 免疫细胞化学 (ICC) 是免疫染色最常见的应用。 IHC 用于标记组织，而 ICC 用于识别细胞中的特定蛋白质或抗原。

目标背景文献 (1)BDY (BODIPY®) 染料封闭缓冲液和试剂点击反应 Janelia Fluor® 染料花青染料（Cy 染料）ICC 和IHC CounterstainsJanelia Fluor® Dyes For IHC and ICCStandard Fluorescein, Coumarin and Rhodamine DyesTFAX (AF) DyesTyramide Signal Amplification (TSA)Related CategoriesMitoBrilliant™ DyesTissue Clearing

这两种技术的原理是相同的，用标记抗体识别独特的靶抗原

检测方法有直接法（一步染色法）或间接法。前者带有标记抗体，通常是荧光分子（例如 FITCCat. No. 5440）或发色团/底物（例如辣根过氧化物酶 (HRP)），它直接结合感兴趣的抗原。后者涉及一抗与靶抗原结合，标记二抗与一抗结合。

直接法快速、简单，但不如间接法灵敏。间接方法对于检测低水平表达的靶标特别有用。

免疫组织化学 (IHC)/免疫细胞化学 (ICC) 原理：直接和间接方法 步骤 直接法 间接法 1 用特异性一抗标记抗原 用特异性一抗标记抗原 2 洗掉多余的一抗 洗掉多余的一抗 3可视化样本，例如带有标记二抗的荧光显微镜标签ody 4 - 洗掉多余的二抗 5 - 在 IHC 和 ICC 中的荧光显微镜下观察样品ICC 和 IHC 应用中低丰度目标的检测能力。

辣根过氧化物 (HRP) 催化标记的非活性酪胺（例如生物素酪胺，货号 6241）转化为反应性自由基，然后结合到相邻的酪氨酸残基显着增加了标记的密度。根据使用的检测方法，酪胺试剂可以与荧光染料或半抗原结合。

图 1：酪胺信号放大原理：组织 or 细胞样本用一抗和二抗标记。与辣根过氧化物酶 (HRP) 预偶联的二抗暴露于 H2O2。这会催化标记的酪胺底物转化为高活性物质，与抗体和 HRP 附近的蛋白质上的酪氨酸残基结合，从而放大信号。

IHC 和 ICC 复染

初始标记后在 ICC 和 IHC 的步骤中，通常应用称为复染的第二种染色，这有助于提供对比度，以便可以更清楚地看到主要标记。根据实验要求，复染可以对特定类型的生物分子表现出高度特异性，例如作为 DNA 或细胞骨架，或染色整个细胞。苏木精（货号 5222）、Hoechst 染色剂（Hoechst 33342 货号 5117）或 Hoechst 33258（货号 5824）和 DAPI（货号 5748）是常用的复染剂。重要的是，在选择复染剂时，它们具有与检测抗体偶联的荧光染料的最小光谱重叠。

IHC 和 ICC 封闭缓冲液

为减少一抗或二抗的非特异性结合，封闭缓冲液由牛血清白蛋白 (BSA) 等试剂制成（目录号 5217）用于阻断非目标结合位点。除了使用封闭缓冲液外，还可以改变孵育时间和温度以最大化特异性结合，从而为任何抗体组提供最佳检测窗口。

选择多色免疫染色染料

选择多种荧光染料进行免疫染色时，重要的是具有最小的光谱重叠以提供最清晰的结果。使用我们的光谱查看器来计划您的实验。

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