对于下游PCR，我们推荐OneTaq 2X Master Mix (NEB #M0482 or M0485) for PCR检测高达 5kb，Q5 热启动高保真 2X 预混液 (NEB #M0494) 可实现最高保真度，或 LongAmp Taq 2X 预混液 (NEB #M0287) 可实现更长产物的高产量。
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New England Biolabs（NEB）公司近日推出了一种性能强劲的DNA聚合酶——Q5超保真DNA聚合酶。它不仅带来了极为出色的保真度，还确保了各种扩增子的可靠扩增，而无论其GC含量如何。
对于测序、SNP检测、蛋白表达和基因功能研究等应用而言，高保真扩增是很关键的。然而，知易行难。对于某些富含GC的区域或具有挑战性的序列，高保真PCR谈何容易，经常要优化很多次，还是产量不高，或有非特异条带。而对于新一代测序而言，后果则更为严重。文库制备时的任何偏向都会带来序列拼接的困难，甚至是序列丢失。这个问题也常常困扰着科学界的人们。
为此，NEB推出了Q5。据称，这种DNA聚合酶的保真度比普通的Taq酶高50倍，导致扩增产物的错误率极低。为什么会这么高？这是因为聚合酶与Sso7d DNA结合结构域融合，从而改善了保真度、速度和性能可靠性。
以往的高保真聚合酶总是给人以效率低、扩增慢的感觉。而Q5超保真DNA聚合酶的延伸速度则有了很大的改进。对于简单的模板，比如质粒或大肠杆菌基因组DNA，延伸速度可达10 s/kb；而即使是植物、哺乳动物基因组DNA等复杂模板，在1 kb以下时，延伸速度仍为10 s/kb，超过1 kb时，速度也达到20-30 s/kb。
Q5的缓冲液体系也为PCR产物的成功扩增立下汗马功劳。它确保了各种扩增子的可靠扩增，而无论其GC含量如何。对于GC含量在65%左右的常规或复杂扩增子，Q5 Reaction Buffer带来了可靠的扩增。而对于更高GC含量的扩增子，Q5 High GC Enhancer的添加则确保了高性能。
Q5还有一个热启动版本，全名为Q5热启动超保真DNA聚合酶（这名字可真长啊）。与常规的化学修饰或抗体热启动不同，Q5热启动利用了一种独特的适体（aptamer）。这种分子通过非共价相互作用与聚合酶结合，在反应建立时阻断其活性。进入循环过程后，聚合酶激活。Q5热启动不需要单独的高温激活步骤，缩短了反应时间，使用上也更方便。
Q5和Q5热启动目前都有单独的酶或2x预混液形式可供选择。另外，NEB还专门开发出一种单独的配方NEBNext High-Fidelity 2X PCR Master Mix，以满足新一代测序文库制备的需求。
Q5的五大优势：
1. 保真性 – 极为出色的保真度，比Taq酶高100倍
2. 可靠性 – 高特异性和产量，且优化极少
3. 覆盖度 – 各种扩增子上的卓越性能（从高AT到高GC）
4. 速度 – 短的延伸时间
5. 扩增子长度 – 20 kb简单模板和10 kb复杂模板的可靠扩增
（生物通 余亮）
