主页工具和资源使用指南组织 RNA 纯化指南组织 RNA 纯化指南使用适量的起始材料。这确保了足够的 RNA 产量，而不会超过柱的结合容量。样本过多可能会降低裂解效率，引入过量的细胞成分而不是 RNA，并影响 RNA 与 RNA 纯化柱的结合。重要的是要注意起始材料的最大量因低产量（例如，大脑和肌肉）和高产量（例如，脾脏和肝脏）组织而异。新鲜或冷冻组织可以使用君主总 RNA 小量制备试剂盒（NEB）进行处理#T2010）。一般来说，样本应在收获后快速冷冻或快速处理，以确保 RNA 保持完整并准确反映收获时的基因表达谱。按如下方式处理新鲜或冷冻样品：新鲜组织（最多 20 毫克）：收获后，将组织放在冰上并立即处理通过将样品与 Monarch DNA/RNA 保护试剂 (NEB #T2011) 混合来进行。内源性核酸酶可快速降解 RNA 并对结果产生负面影响。冷冻组织（最多 20 毫克）之前未储存在稳定试剂中：保持组织冷冻直至与君主 DNA/RNA 保护试剂（NEB #T2011）混合。新鲜或冷冻组织块更大超过 20 mg：加入 Monarch DNA/RNA Protection Reagent 后立即匀浆样品和/或用蛋白酶 K 消化。如有必要，将与保护试剂混合的样品短暂放置在冰上，直到它们可以被处理。储存在君主 DNA/RNA 保护试剂中的组织：让样品平衡至室温。确保保护试剂的体积与方案建议一致。保存在 RNAlater® 中的组织：在添加 DNA/RNA 保护试剂之前去除 RNAlater。务必使用 1X 浓度的 Monarch DNA/RNA 保护试剂。稀释适当体积的提供的 2X Protection Rea根据您正在处理的样品数量，用无核酸酶水浓缩。在用蛋白酶 K 消化之前进行机械匀浆通常会增加 RNA 产量。将蛋白酶 K 的量加倍和/或增加孵育时间也可能会增加某些组织的产量。添加君主 RNA 裂解缓冲液 (NEB #T2012) 和所有后续步骤应在室温下进行。

其他资源：

使用君主总 RNA 小量制备试剂盒成功纯化 RNA 的一般指南选择样品输入指南使用 Monarch 总 RNA 小量制备试剂盒时的量 RNA 纯化故障排除指南

产品描述

概述：T7 表达 IysY E.coli 感受态细胞适用于高效级转化和蛋白表达。

基因型：MiniF lysY (CamR) / fhuA2 lacZ::T7 gene1[lon] ompTgal sulA11 R(mcr-73::miniTn10--TetS)2 [dcm]R(zgb-210::Tn10--TetS) endA1 D(mcrC-mrr)114::IS10

特性：

1）在 lac 操纵子上有 T7 RNA 聚合酶，无 λ 前噬菌体

2）通过溶菌酶对 T7 RNA 聚合酶进行调控，从而允许克隆潜在的毒性基因

3）LysY 作为特殊的 T7 溶菌酶，因缺少酰胺酶活性，从而降低细胞在诱导过程中的溶菌现象

4）Lon 和 OmpT 蛋白酶缺失

5）不受限于 DNA 是否甲基化

转化效率：高效级：0.6–1 x 109 cfu/μg pUC19 DNA

未被转化的细胞需要检测抗 Φ80 噬菌体感染的能力，这是检测抗 T1 噬菌体感染能力的标准检测法。此外，未转化细胞还要检测其对氨苄青霉素、四环素、卡那霉素和链霉素的敏感性。结果显示未被转化的该感受态细胞抗氯霉素。

随产品提供的试剂：

25ml SOC Outgrowth 培养基（室温贮存）

0.025 ml, 50 pg/μl pUC19 对照 DNA（–20°C 贮存）

注意事项：感受态细胞应贮存于 –80°C，一旦融化，就不能再被冻存。–20°C 贮存会显著降低其转化效率。只要温度高于 –80°C，即使未被融化，细胞转化效率也会降低为零。