HomeResearch LabsSamuelson LabSamuelson Lab改善非分泌蛋白的噬菌体展示改善非分泌蛋白的噬菌体展示

在 M13 噬菌体展示过程中，非自然分泌的蛋白质可能会在通过周质的途中被氧化和错误折叠。我们已经证明，通过使用 DsbA-E.coli 细胞和将靶蛋白引导至 SRP 通路的信号肽，胞质蛋白也可以在 M13 噬菌体上进行功能性展示。

一种新颖的 M13 噬菌体展示方法：工程大肠杆菌结合 SRP 依赖性蛋白质靶向 Chen, M. and Samuelson J.C. (2016) A DsbA-deficient Periplasm Enables Functional Display of a Protein with Redox -M13 噬菌体的敏感折叠。生化PMID：27210801

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继续主页试剂和分子生物学产品PCR、qPCR 和扩增技术产品Q5® 高保真DNA 聚合酶产品Q5® 高保真DNA 聚合酶高保真聚合酶如何确保插入正确的碱基？ 如何实现高保真聚合酶确保插入正确的底座？返回 Q5® High -保真 DNA 聚合酶

高保真 DNA 聚合酶有几个检查点，以防止在复制 DNA 时产生和传播错误。

在聚合过程中，高保真聚合酶对正确与错误的三磷酸核苷酸具有显着的结合偏好。如果不正确的核苷酸确实结合到聚合酶活性位点，则由于活性位点的次优结构，掺入会减慢复杂的。日时间增加了不正确的核苷酸在掺入之前解离的机会，从而允许该过程重新开始（并使正确的三磷酸核苷酸结合）（1,2）。如果插入不正确的核苷酸，校对 DNA 聚合酶具有一道额外的防线。它们可以\"感知”由错配碱基引起的扰动，并将生长中的 DNA 链的 3\' 端移动到校对 3\'→5\' 核酸外切酶结构域中。在那里，错误的核苷酸被 3\'→5\' 核酸外切酶活性去除，然后链移回聚合酶结构域，聚合反应可以继续使用正确的核苷酸。

(1) Johnson, K.A. (2010) Biochimica 等生物物理学报，1804，1041–1048。 PMID：20079883 (2) Joyce, C. M., & Benkovic, S. J. (2004) Biochemistry, 43, 14317–14324。 PMID：15533035

了解 Q5® 高保真 DNA 聚合酶Q5® 高保真 DNA 聚合酶反馈什么是保真度？适用于哪些应用保真度重要吗？高保真聚合酶如何确保插入正确的碱基？如何测量保真度？

产品描述

1）BL21 源增强型菌株

2）最常用的 T7 表达菌株

3）菌落快速培养

4）无动物来源产品

5）抗 T1 噬菌体感染（fhuA2）

概述：T7 表达 E.coli 感受态细胞适用于高效级转化和蛋白表达。

基因型：fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11R(mcr-73::miniTn10--TetS)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10--TetS)endA1 Δ(mcrC-mrr)114::IS10

特性：

1）在Lac操纵子上有T7 RNA 聚合酶，无 λ 前噬菌体

2）Lon和OmpT蛋白酶缺失

3）不受限于DNA是否甲基化

转化效率：高效级：0.6–1 x 109 cfu/μg pUC19 DNA

未被转化的细胞需要检测抗 Φ80 噬菌体感染的能力，这是检测抗 T1 噬菌体感染能力的标准检测法。此外，未转化细胞还要检测其对氨苄青霉素、氯霉素、四环素、卡那霉素和链霉素的敏感性。

随产品提供：

25ml SOC Outgrowth 培养基 （室温贮存）

0.025 ml 50 pg/μl pUC19 对照 DNA （–20°C贮存）

注意事项：感受态细胞应贮存于–80°C，一旦融化，就不能再被冻存。–20°C贮存会显著降低其转化效率。只要温度高于–80°C，即使未被融化，细胞转化效率也会降低为零。