阳离子脂质体的制备和细胞转染设备和材料#850725:1,2-Dioleoyl-sn-Glycero-3-Phosphoethanolamine (DOPE) Avanti Cat.Cationic lipidChloroformDistilled waterBufferGlass vial with teflon linersGlass syringesNitrogen or Argon gasVacuum system0.22µm filter (optional) )程序将每种脂质成分（例如 DOTAP/DOPE）溶解在氯仿中，达到方便的工作浓度（1-10mg/mL）。使用玻璃注射器将所需量的每种成分等分到玻璃瓶中。有关处理有机脂质溶液的更多信息.彻底混合玻璃瓶中的成分。使用氮气或氩气流小心蒸发氯仿（充分通风）。将脂质残留物在真空泵上放置 10-15 分钟以去除任何残留的有机溶剂。从中取出小瓶真空泵，并立即以两倍于最终脂质浓度的浓度悬浮在蒸馏水中。将脂质分散体进行浴超声处理至澄清（2-5 分钟）。加入等体积的e 缓冲液（例如，308mM NaCl、40mM Hepes，pH7.4），并进一步超声处理 2 分钟。溶液可以通过 0.22µm 过滤器进行灭菌。脂质/DNA 混合物的制备将阳离子脂质分散体与 DNA（1µg/ 10µg 脂质）在合适的容器中。孵育脂质/DNA 混合物 5 分钟。 5 分钟后，混合物即可转染细胞。细胞转染用 HEPES 缓冲盐水洗涤细胞单层细胞两次。用脂质/DNA 混合物在 HEPES 缓冲盐水（每 100 毫米培养物 3 毫升混合物）中孵育细胞培养皿）在 37°C 下 90 分钟。孵育期后，更换培养基或根据需要补充。培养细胞所需的时间和收获。注释 DOPE：阳离子脂质的常见摩尔比为 3:1 和 1:1 .在某些情况下，完全由阳离子脂质组成的脂质系统已用于转染细胞。引用的缓冲系统旨在用于体外使用，并不表明该系统可能适用于体内使用。参考RENCESLeventis, R., & Silvius, J.R. (1990)。 Biochim.Biophys。学报 1023：124-132。脂质-DNA 制备（转染）阳离子脂质体的制备和细胞转染阳离子脂质/低聚物复合物的制备过程多层囊泡 (MLV) 的制备

以下是用于制备脂质体的冻干（冷冻干燥）脂质混合物方案的简要概述：

将脂质溶解在氯仿中。以适当的比例混合脂质.使用干燥氮气流小心蒸发有机溶剂。将脂质混合物重悬于环己烷中。如果混合物不完全溶于环己烷，则加入少量乙醇（环己烷体积的 1-2%）。不要使用过多的乙醇，因为存在过量乙醇时溶液不会冻结。使用干冰冷冻环己烷溶液。快速将冷冻的混合物置于高真空系统（冻干系统）中。一般来说，\"室内真空”系统对于这个过程来说不够强大。样品应保持冷冻状态直至完全干燥；如果样品开始解冻，要么是真空​​不够强，要么是乙醇含量过多。解冻的样品不会产生白色粉末并且它可能会从小瓶中爆出或起泡。将样品在真空系统中放置 3-5 小时（取决于使用了多少环己烷）或直到样品完全干燥（小瓶摸起来应该不会冷或从真空中取出时有环己烷的气味）。注意：这会产生一种干燥的白色粉末，很容易悬浮在水中。另一种方法是使用适当的水性缓冲液重悬通过蒸发氯仿产生的脂质膜。将脂质混合物悬浮在水性缓冲液中（缓冲液温度应高于脂质的相变）并允许混合物在相变以上水合脂质温度 30-60 分钟（偶尔涡旋）。此过程产生大的多层囊泡（LMV 或 MLV）。对于要包埋的水溶性化合物，遵循相同的方案，只是将化合物溶解在用于重构干脂质的水性缓冲液中，并且去除外部化合物（未封装）ve 通过凝胶过滤。参考文献

Frank Szoka, Jr. & Demetrios Papahadjopoulos, (1980)，\"脂质囊泡（脂质体）的比较特性和制备方法”，Ann。生物物理学家。生物工程, 9:467-508.

脂质体制备用于脂质体形成的脂质多层脂质体 (LMV) 的制备通过挤出 (LUVET) 制备大的单层囊泡制备巨型囊泡 Bicelle 制备脂质体制剂的当前应用链接脂质物理特性膜生物物理学实验室 - 水性磷脂混合物的结构参数Cyber​​lipid 中心 - 脂质研究资源网站SphinGOMAP - 鞘脂生物合成的进化途径图，包括许多已知的鞘脂和糖鞘脂，根据其生物合成来源排列脂质有机物Nu-Check Prep Inc.Lecithin Fractionation TechnologyAmerican Lecithin CompanyLiposome Formulation and PackagingBaxter Pharmaceutical Solutions（原 Cook）——提供全系列的制药合同制造服务Ben Venue Laboratories——专业制药制造Enzon——为潜在合作伙伴提供大规模制造专业知识OctoPlus B.V.——药物输送、制剂开发和 GMP药物制造冷冻断裂电子显微镜纳米分析实验室——药物和生物样品的冷冻断裂电子显微镜脂质提取脂质提取脂质提取反应方法

Data:

Molecular Formula

C₄₆H₈₃ N₃NaO₁₂PS

Percent Composition

C 57.78%, H 8.75%, N 4.39%, Na 2.40%, O 20.08%, P 3.24%, S 3.35%

Purity

>99%

Stability

1 Year

Storage

-20°C

Molecular Weight

956.193

Exact Mass

955.533