引言

    使用GDS-80基因枪进行基因转染实验，步骤简单、操作方便。也正因为如此，操作者要在实验前对GDS-80基因枪的每项条件设定都认真进行调试。如之前文章所述，GDS-80基因枪的轰击条件设定与传递效率密切相关，这些设定包括压力设定、气体输出强度设定，以及气体流速调节。在执行轰击之前，应将GDS-80基因枪调节至最佳轰击状态。调节气体输出强度时，需对GDS-80基因枪主机背面的旋钮进行调节，以使其轰击时达到最均匀散射轰击状态。通过下文中的实验，我们将看到GDS-80基因枪的气体输出强度参数设定对实验结果的重要性。

 

器具和材料

* 整套GDS-80基因枪（4.5毫米口径管筒，包括压力调节器和软管装配）（Wealtec）* 无菌操作台* 3 cm目标间隔件（Wealtec）* 装有超过1000psi的氦气（纯度为99.999％）的气缸* 样本：洋葱表皮 

步骤

1.根据说明书里的标准操作步骤来设置GDS-80基因枪系统。2.进行实验前，用恰当的方式来消毒所有的设备和器材（GDS-80基因枪无菌操作台具体操作步骤：点此查看）。3.在无菌操作台中把枪管和加样套筒组装在GDS-80基因枪主机上，并把整个GDS-80基因枪系统连接起来。4.把传送压力设置在50/60 psi，气体流速设置在大约为10〜15L/min。5.将 GDS-80基因枪主机背面的旋钮设定调节至0〜4圈。6.轰击之前，准备好质粒DNA /金粉溶液。（1µg DNA / 0.6 mg金粉）7.把洋葱表皮切成适当的大小（3 cm×3 cm×2 mm），并在使用前消毒。8.把10µL的DNA样品溶液等分倒入样品装载孔。9.使用3 cm的目标间隔件（将枪头固定在样品上方3 cm）对洋葱进行轰击。10.培育样品2天，在显微镜下观察结果。图一.在不同的旋钮圈数设置（气流强度）和气体压力设置下，两次轰击洋葱样品所得到的结果 (a)~(c) 50 psi and (d)~(f) 60 psi    图1中在各项设置下的每个实验结果都被重现了至少6次。如结果所示，当旋钮设置在0至4圈时，实验中GDS-80基因枪的各种对应气压设置都可以得到明显转染结果。    然而，每种设置下的可重现性并不相同。当采用50或60 psi，旋钮设定0到2圈时，GDS-80基因枪气体输出不够强，使得在图（A）（B）（D）（E）中的转染效率在不同拍摄照片间显示出了不同，可以看出在这种气体输出强度的设定（旋钮圈数设定）中，用户将无法在相同的条件下获得可重复的数据。当旋钮圈数设定更高时，气体输出变得更加稳定，而且可重复性也变得更好。    可以看出，当旋钮圈数设定增加时，GDS-80基因枪能够在更强的气体输出强度下工作，并因此获得更稳定的转染结果。尤其当传递基因至更坚硬的样品表面时，需要调整GDS-80基因枪旋钮到更多圈数以提高转染效率。有时用户得到的转染结果集中偏向于样品一侧，这是由于GDS-80基因枪在轰击前进行轰击均匀分布测试时，气体输出强度调节没有调节到让轰击均匀分布效果所致，用户应该根据说明书中指示，设定适当的旋钮调节圈数，以得到最均匀的轰击输出效果，并保证最好的可重现性，以及让每一枪轰击条件保持一致。