松弛 pHOT -1 质粒 DNA 是检测 DNA 旋转酶超螺旋活性的理想底物。
SKU:TG2035类别:DNA 底物标签:dna 底物e, phot1, 松弛 dna 底物, 松弛 phot1 说明产品信息运输和储存资源松弛 pHOT-1 是一种 DNA 质粒,适合测定 DNA 旋转酶的超螺旋活性。它还可用于分析 DNA 连接数的变化以评估嵌入。使用高纯度拓扑 I 松弛反应制备质粒,然后对松弛产物进行失活和重新纯化。然后,TopoGEN 工作人员验证每批样品的松弛状态,并验证大肠杆菌 DNA 旋转酶和金黄色葡萄球菌 DNA 旋转酶可以使底物超螺旋。
< p>质粒 pHOT-1 含有源自四膜虫核糖体基因重复的高亲和力拓扑 I 切割位点(Westergaard 及其同事描述的十六聚体序列,参见 Bonven 等人,1985)。该构建体可用作拓扑 I 切割底物,因为在不存在喜树碱的情况下,该酶可在十六聚体位点有效切割。这使得 t研究人员严格评估新的潜在拓扑结构 I 抑制剂,因为单一背景裂解是内置对照;如果试剂刺激包含十六聚体位点的片段中的该序列和/或任何其他序列的切割,则容易显露出显着的切割。通常,很难捕获 DNA 上的拓扑 I 切割;由于裂解复合物按化学计量消耗酶,因此必须使用更多的酶。因此,DNA 切割分析需要更高水平的酶。可以使用 Maniatis 克隆书中的方案中所示的位点从多接头中分离片段,进行末端标记并用作切割底物。松弛的 pHOT-1 DNA 在环境温度下运输,应保存在室温下。 4°C。
宽松的 pHOT-1 数据表
宽松的 pHOT-1 DNA 参考文献Bonven 等人,Cell 41:541( 1985)
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