enChIP（Engineered DNA-binding molecule-mediated chromatin immunoprecipitation）技术是2013年由大阪大学Toshitsugu Fujita和Hodaka Fujii发表的一项技术，可以利用CRISPR/Cas9系统纯化特异性的基因组区域。其原理是将目标基因组序列克隆到gRNA载体，载体的5´端用于识别目标序列，3´端形成双链RNA结构绑定Cas9蛋白。当gRNA和内切酶活性缺失的Cas9蛋白（dCas9）共表达时，目标基因组区域能够通过特异性识别Cas9所携带标签的抗体被富集出来。因为使用的是催化活性缺失的Cas9内切酶，双链DNA不会被切割，所以目标基因组区域的DNA，RNA和蛋白质都可以被回收。 Active Motif与发表enChIP技术的两位科学家合作，将enChIP技术标准化，推出首款enChIP试剂盒。enChIP试剂盒中表达的dCas9 蛋白连接了Active Motif 针对ChIP实验设计的AM-tag标签。首先将可以表达gRNA和带有AM-tag的dCas9 载体转染细胞，然后将细胞进行福尔马林固定，裂解以及超声片段化处理，最后使用AM-tag标签的特异性抗体将gRNA/dCas9复合物结合的基因组区域沉淀富集。得到的DNA，RNA和蛋白质经过纯化回收后可用于下游分析。 enChIP技术可用于检测gRNA特异性，DNA与DNA相互作用，以及基因组特定区域内的DNA-RNA，DNA-蛋白质之间的相互作用。 应用实例enChIP 用于鉴定gRNA 特异性方法：在19号染色体CTCF结合的500bp范围内设计两条gRNA，两条gRNA分别识别两个长度为20nt的不同序列。每一条gRNA克隆到pAM_dCas9载体，转染HEK293T细胞。设置没有gRNA 的空载作为阴性对照。染色质制备和免疫共沉淀按照试剂盒说明操作。富集的DNA通过NGS分析，背景使用\"No gRNA”去除。数据与相同细胞类型的CTCT ChIP-Seq 数据进行比较。 结果：RNA1 在目标区域有很强的富集，而gRNA2 在目标区域之外出现了大量的非特异性结合。这也说明enChIP可以验证CRISPR/Cas9 gRNA特异性。了解更多enChIP技术知识，请点击以下视频链接：Dr. Hodaka Fujii对enChIP介绍视频链接：Locus-Specific Biochemical Analysis of Genome Functions Using enChIP with CRISPR更多产品信息欢迎访问 Active Motif 官网http://www.activemotif.com/catalog/1172/enchip