直接 ELISA 使用单一偶联一抗检测固定化抗原（在测定板上）。直接检测的优点是只需要一种抗体，因此需要的步骤更少。来自二抗交叉反应的非特异性信号被消除。
ELISA 有四种主要类型：直接、间接、竞争和夹心。在此处查找有关不同类型 ELISA 的更多信息。
请参阅下面的直接 ELISA 一般方案。
试剂碳酸氢盐/碳酸盐包被缓冲液（100 mM）：3.03 g Na2CO3、6.0 g NaHCO3、1000 ml蒸馏水，pH 9.6 磷酸盐缓冲液：1.16 g Na2HPO4、0.1 g KCl、0.1 g K3PO4、4.0 g NaCl（500 ml 蒸馏水）pH 7.4 封闭缓冲液：1% BSA/血清/脱脂奶粉/酪蛋白/ PBS 洗涤缓冲液中的明胶：PBS 酶偶联一抗中的 0.05% (v/v) 聚山梨酯 20 程序直接 ELISA 程序可概括为 4 个步骤ps：平板包被、平板封闭、抗体孵育和检测。
平板包被使用包被缓冲液将抗原稀释至终浓度为 20 µg/ml。注意：20 µg/ml 的浓度会使孔中的可用位点饱和。）用 100 µl/孔的抗原包被 96 孔板。连续稀释板。盖上板并在 4°C 下孵育过夜。丢弃涂层溶液。使用洗涤缓冲液清洗板 3 次。板封闭使用 200 µl/孔的封闭缓冲液封闭包被孔中任何剩余的蛋白质结合位点。覆盖并在室温下孵育 1-2 小时。使用洗涤缓冲液洗涤板 3 次。抗体孵育添加 100 µl/孔稀释于封闭缓冲液中的抗体。 （注意。抗体稀释度差异很大，应由最终用户确定。作为指导，使用 0.1 µg/ml 的纯化抗体终浓度。）盖上盖子并在室温下孵育 1-2 小时。使用 wash 清洗板 3 次buffer.DetectionAdd 100 µl/孔底物e 溶液。孵育以进行开发（如有必要）。添加 100 µl/孔的终止溶液。使用读板器读取吸光度（光密度）![\"\"](\"https://www.abbexa.com/email/images/Direct-ELISA-new.png\")
分析根据获得的数据绘制标准曲线从读板机。显示 x 轴（对数刻度）上的浓度与 Y 轴（线性）上的吸光度。使用绘制的标准曲线图来插值样品的浓度。
