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ChromoTek Proteintech 的故事 |蛋白质科技集团,ChromoTek 常见问题解答
ProductsImmunology免疫学

免疫学的核心是识别和区分诊断和治疗所必需的许多不同免疫细胞。这包括对先天性和适应性免疫反应以及病原体识别、免疫细胞激活和募集、细胞因子分泌、炎症和抗体产生等过程的研究。浏览我们的免疫学抗体系列以及 ELISA 和 IF 实验的有用技巧。

特色产品特色产品免疫细胞标记物非可见文本特色产品细胞极性标记非可见文本特色产品免疫反应非可见文本特色产品PD-1 / PD-L1 通路非可见文本

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ProductsDevelopmental BioDevelopmental Bio

发育生物学涵盖与生物体生长和发育相关的研究。发育生物学关注受精后的胚胎发生事件,还包括细胞生长、分化和形态发生的遗传控制。了解 Proteintech 如何利用相关资源和抗体帮助您进行发育生物学研究。

纤毛开发非可见文本

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Proteintech StoryView

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1、GFP-Trap®可识别的GFP衍生物类型有哪些?
(1) eGFP, wtGFP, GFP S65T
(2) TagGFP
(3) eYFP, YFP, Venus, Citrin
(4) CFP
不能识别:TurboGFP,所有的RFPs

2、RFP-Trap®可识别的RFP衍生物类型有哪些?
(1) mRFP
(2) mCherry
(3) mOrange
(4) mPlum
(5) mRuby
(6) mKate2
不能识别:DsRed、mRFPruby、TagRFP、所有GFPs

3、Nano-Trap® (GFP-Trap® / RFP-Trap®) 的结合能力如何?
Nano-Trap®的结合能力取决于珠子。每10μL浆液,琼脂糖珠可结合2~3μg GFP,磁性颗粒可结合0.25-~0.5μg GFP。

4、可以从GFP-Trap洗脱结合蛋白么?
关于定量洗脱,可以将样品至于SDS上样缓冲液中95℃煮10min(详见protocol),或者在0.2 M的甘氨酸(pH2.5)中孵化0.5~2min,随后用0.1体积的1M Tris碱中和。

5、是否可以从GFP-Trap洗脱出自然状态的结合蛋白,比如,在凝胶迁移实验或功能分析实验中?
可以尝试洗脱游离的GFP。但是,请注意,这种方法,不能定量洗脱出目标融合蛋白。

6、怎样才能避免非特异性的蛋白与GFP-Trap交互作用而结合?
关键操作步骤,是在孵化液中稀释洗涤剂的浓度。我们建议,洗涤剂为终浓度0.1%(如NP-40 或TX-100),且最终体积不少于0.4mL。另外,我们建议,要测定各种洗涤缓冲液的盐浓度,使其范围在150mM-500mM范围内,以去除非特异性结合的亲水性蛋白。

7、在binding过程中,N-端与C-端GFP融合蛋白之间是否存在差异?
GFP-Trap®对C-末端的GFP融合蛋白的亲和力稍高,若要消除这种差异,可以加长孵化时间(1-2h取代15-30min)

8、是否可以在组织样品(即变性缓冲液)中直接纯化GFP标记的融合蛋白?
原则上,GFP-Trap®即使在恶劣的缓冲条件下(如,RIPA缓冲液,含0.1%SDS或1M尿素),也非常稳定。

9、可结合的GFP-Trap®珠的GFP结构,是否有大小限制?
无。

10、如果在洗脱液中,有剩余的背景怎么办?
建议使用Chromotek的blocked particles(bab-20 or bmp-20)对样品进行预处理。