细胞迁移和侵袭如
鸭嘴兽Platypus遨游海洋般顺畅舒适上次跟大家介绍了漂亮的迁移图，这次举个例子，来看看这个迁移图是怎样一步步做出来的。
细胞：MDA-MB-231 乳腺上皮细胞
Platypus产品：Oris™ Cell Migration Assay - TriCoated CMATR1.101 (96孔板，分别有32孔胶原蛋白包被，32孔纤连蛋白包被和32孔未包被)
分析软件：ImageJ ImageJ 是NIH上一款免费的图像分析软件网址提供给大家（http://rsb.info.nih.gov/ij) ；若进行particle analysis请点击阅读原文
实验目的：通过计数优化迁移条件
方法
1.将MDA-MB-231接种到96孔板，沿着stopper两边的小沟将100ul细胞悬液加入well中（如图2），然后可以轻轻摇一下板子，有助于细胞铺匀，37℃，5% CO2培养箱孵育 4 -18h（不同细胞系时间不同），使得细胞贴壁。Q:接种密度多大，多大汇合度？
A:一般是您平时实验最佳接种密度的十倍，这样会更容易达到90%-95%的汇合度。
2.贴壁完成后，将stopper去掉（作为0h参照的stopper要保留到迁移结束数据处理时再拔掉），如下图，要垂直拔起，可不要当作起子来使用哦。
3. 将培养基去掉，用PBS洗去未贴壁细胞。加上培养基后继续培养16h完成迁移过程。
4. 细胞固定，1:2000 DAPI 核染，数据分析。
5. Zeiss Axiovert 200 倒置显微镜 ，5X 物镜，CCD 相机。使用 ImageJ （version 1.42l）计数。 首先设置threshold (Image→ Adjust-→ Threshold)，然后选择\"Apply”, thresholded image 即转换为 binary image。重叠的细胞核可通过Watershed segmentation(Process→ Binary→ Watershed)分开。然后通过 Edit→Selection→ Specify，在well中间限定一个直径为2mm（与stopper的底部直径相同）的圆圈(circular region-of-interest ,ROI)。在Specify 窗口 \"width” 和\"height” 都设定为2mm，选定\"oval”。
ROI中染色的细胞核计数通过Analyze→ Analyze particles即可完成。选中”Show Masks”可将检测目标画出。\"Summary” 和 \"Exclude on Edges” 勾选上进行数据分析。
结果
由图可以看出：MDA-MB-231在胶原蛋白/纤连蛋白包被和未包被的环境中迁移明显不同。一次试验即可优化迁移条件。HCI和Platypus的结合可得到准确、重复性高，漂亮养眼的结果。实验过程如有疑问，请联系达科为，我们一起探讨学习。 下一次，给大家介绍一下Platypus迁移实验中会用到的细胞荧光染料，使结果更加丰富多彩。像这样，可以观察到的颜色艳丽的细胞骨架，通过Platypus和下期我们要讲到的染料以及HCI的结合，是完全可以做到的。