6. 在上步骤获取的细胞中,加入200ul ProcartaPlex Cell Lysis Buffer(EPX-99999-000)。
7. 吹吸混匀8-10次,冰上孵育5min;
8. 将所有细胞转移到1.5ml离心管;
9. 4 C, 14000g(离心机最大转速)离心10min;
10. 将上清转移到新管中。该上清可立即用于检测或者保存在-80 c;
11. 按照多因子检测试剂盒操作方法检测。25ul细胞裂解液样本加入25ul Universal Assay Buffer(EPX-11111-000),作为一个样本加入到样本孔中。
► 悬浮细胞裂解方法
1. 培养1 106-1 107个细胞;
2. 将细胞转移到15ml圆形离心管,4 C, 500g离心5min;
3. 小心去除上清,加入5ml预冷PBS重悬细胞,4 C, 500g离心5min;
4. 尽可能多的去除上清,小心不要碰到细胞沉淀。
5. 在上步骤获取的细胞中,加入200ul ProcartaPlex Cell Lysis Buffer(EPX-99999-000)。
6. 吹吸混匀8-10次,冰上孵育5min;
7. 将所有细胞转移到1.5ml离心管;
8. 4 C, 14000g(离心机最大转速)离心10min;
9. 将上清转移到新管中。该上清可立即用于检测或者保存在-80 C。
10. 按照多因子检测试剂盒操作方法检测。样本孔加入25ul细胞裂解液和25ul Universal Assay Buffer(EPX-11111-000)。
可选步骤:建议细胞裂解后上清进行蛋白定量检测。我们推荐使用Lowry法蛋白定量检测。建议将所有样本使用预冷的ProcartaPlex Cell Lysis Buffer调整样本蛋白浓度方为4-8 mg/ml。
组织样本裂解方案:1. 收集组织样本-脾脏、肺、脑、肾脏、肝脏和心脏组织,称重。
2. 按照每100mg组织加入500ul ProcartaPlex Cell Lysis Buffer (EPX-99999-000)。
3. 使用研磨、机械匀浆器、磁珠裂解等方法将组织进行裂解匀浆;
4. 4 C,16000g 离心10min;
5. 将上清转移到新离心EP管中。
6. 使用蛋白定量试剂盒对上清进行蛋白定量。
7. 使用1*PBS把样本进行稀释到10mg/ml;
8. 按照多因子检测试剂盒Protocol进行检测。样本孔加入25ul Universal Assay Buffer(EPX-11111-000)和25ul 稀释后的组织上清液。