sp法是:一抗+生物素化二抗+HRP标记的链霉卵白素(HRP标记的亲和素)酶标亲和素-生物素技术(labelledavidin-biotintechnique,简称LAB法)。即用辣根过氧化物酶直接标记avidin,用biotin标记2抗。
关键步骤为3步:
Ag+Ab1+(Ab2-B)+A★
(A★为HRP标记的卵白素)A★与2抗的生物素结合,avidin起桥联作用。如将该法中的卵白素(avidin)变换成链霉卵白素(streptavidin),LAB法即成LSAB法,或称SP法。
据认为LAB法比ABC法敏感2~4倍,而LsAB法因streptavidin不与组织细胞中内源性生物素结合而特异性更高。现在SP法已趋于取代ABC法而广为应用。
sabc法是:一抗+生物素化二抗+abc复合物(是使用前亲和素与酶联生物素现配使用)
亲和素-生物素-过氧化物酶复合物技术(avidin-biotin-peroxidasecomplextechnique,简称ABC法)。
关键的程序步骤为3步:
Ag+Ab1+(Ab2-B)+AB★C复合物
(Ab2-B为生物素标记的第二抗体)(B★为生物素标记的过氧化物酶)AB★C复合物是avidin与酶联biotin1比1在使用前30min配置,混匀。1个avidin分子结合了3个biotin分子,剩下1个结合点与2抗的生物素结合,avidin起桥联作用。ABC法敏感性更高,比PAP法敏感20~40倍,背景也更清晰。
个人理解:SP法和SABC法相差不大,一般都可以用.
SP法:
一抗+生物素标记二抗+辣根酶标记链霉卵白素+辣根酶底物显色
SABC法:
一抗+生物素标记二抗+滴加试剂SABC(链霉卵白素+辣根酶标记生物素)+辣根酶底物显色
比较可知,SABC法SP法在原理上基本是一样的。但由于SABC法第3步有放大作用,所以更灵敏一些.可能会出现用SABC法可以做出结果的,用SP法做不出来.总的来说,个人认为SABC法可能好一些!我自己以及周围的同学以前一般都是选用SABC法!
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