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免疫组化染色SP法与SABC法区别

sp法是:一抗+生物素化二抗HRP标记的链霉卵白素(HRP标记的亲和素)酶标亲和素-生物素技术(labelledavidin-biotintechnique简称LAB法)。即用辣根过氧化物酶直接标记avidin,用biotin标记2抗。

关键步骤为3步:

Ag+Ab1+Ab2-B+A

AHRP标记的卵白素)A2抗的生物素结合,avidin起桥联作用。如将该法中的卵白素(avidin)变换成链霉卵白素streptavidin),LAB法即成LSAB法,或称SP法。

据认为LAB法比ABC法敏感2~4倍,而LsAB法因streptavidin不与组织细胞中内源性生物素结合而特异性更高。现在SP法已趋于取代ABC法而广为应用。

sabc法是:一抗+生物素化二抗+abc复合物(是使用前亲和素与酶联生物素现配使用)

亲和素-生物素-过氧化物酶复合物技术(avidin-biotin-peroxidasecomplextechnique,简称ABC)。

关键的程序步骤为3步:

Ag+Ab1+Ab2-B+ABC复合物

Ab2-B为生物素标记的第二抗体)B为生物素标记的过氧化物酶)ABC复合物是avidin与酶联biotin11在使用前30min配置,混匀。1avidin分子结合了3biotin分子,剩下1个结合点与2抗的生物素结合,avidin起桥联作用。ABC法敏感性更高,比PAP法敏感20~40倍,背景也更清晰。

个人理解:SP法和SABC法相差不大,一般都可以用.

SP法:

一抗+生物素标记二抗+辣根酶标记链霉卵白素+辣根酶底物显色

SABC法:

一抗+生物素标记二抗+滴加试剂SABC(链霉卵白素+辣根酶标记生物素)+辣根酶底物显色

比较可知,SABCSP法在原理上基本是一样的。但由于SABC法第3步有放大作用,所以更灵敏一些.可能会出现用SABC法可以做出结果的,用SP法做不出来.总的来说,个人认为SABC法可能好一些!我自己以及周围的同学以前一般都是选用SABC法!

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