还在为ELISA的多次洗板而烦恼吗？还在为ELISA的繁琐步骤而苦闷吗？

HTRF®技术： 免洗的Elisa，传统Elisa的替代技术，跟传统的Elisa有无可比拟的优势：

1. 操作非常简单：空板直接加样，加完即可检测。

2. 体系非常稳定：7天之内可随时检测，信号基本不变。

3. 数据客观真实：可有效去除背景荧光，假阳性率、假阴性率低。

HTRF®原理

HTRF®（均相时间分辨荧光，HomogeneousTime-ResolvedFluorescence）是一种用来检测纯液相体系中待测物的技术。该技术结合了荧光共振能量转移（FRET，FluorescenceResonanceEnergyTransfer）和时间分辨荧光（TRF,Time-ResolvedFluorescence)）两大技术。

荧光共振能量转移（FRET）

利用两种荧光基团，分别称为能量供体（Donor）和能量受体（Acceptor）。在供体和受体相互靠近时，能量从供体转移到受体上，并使后者发出荧光。

由于受体分子的发射光来自于能量转移，所以在实验中无需包被、无需将未结合与已结合的分子分开，即无需洗涤步骤。

时间分辨荧光（TRF）

利用稀土元素中镧系元素的独特性质，其荧光比普通荧光持续时间更长。普通荧光的半衰期为纳秒级，镧系元素的半衰期为毫秒级，有6个数量级的差别。所以在检测时，TRF有一个时间延迟-50微秒，从而使普通背景荧光信号几乎为零。因此TRF的背景非常低，反映样品实际情况。

HTRF®的技术创新点

HTRF®的能量供体是铕（Eu3+）和铽（Tb2+）的穴状化合物（如右图）。在穴状化合物里，Eu和Tb被永久地嵌合在一个笼子中，结构非常稳定，对温度、PH值、金属离子、螯合物等耐受性极强。

HTRF®的能量受体为XL665和d2。两者激发波长为620nm，发射波长为665nm。XL665是改良过的别藻蓝蛋白（APC），其将APC的亚基偶联，使其不能解离，增加了稳定性。d2是第二代受体，光谱学特征与XL665相同，但分子量较小，约为1KD，可减少空间位阻对实验的可能影响。

HTRF®的操作步骤

HTRF®的操作步骤非常简单，只需要将实验所需试剂加进去，然后孵育、检测即可

HTRF®的数据分析

HTRF®采用了比值法来处理数据，可以去除由于溶液通透率、细胞大小、细胞数量不同引起的误差。

HTRF®的应用范围

G蛋白偶联受体研究：受体第二信使检测 受体配体结合 胞内信号分子检测

激酶活性检测：胞外激酶活性检测胞内激酶活性检测

生物标志物检测：基于抗体的夹心法和竞争法检测

抗体检测：抗体重链含量测定、抗体轻链含量测定

生物过程分析：GST含量测定、HIS含量测定、CHO宿主蛋白含量测定

免疫过程分析：CD16结合检测、CD32结合检测、CD64结合检测

相互作用分析：蛋白-蛋白、蛋白-多肽、蛋白-DNA、蛋白-RNA

蛋白修饰：蛋白甲基化、蛋白乙酰化、蛋白泛素化、蛋白水解