PEI转染手册

转染操作流程：1、细胞传代：

转染前24h内分离293T细胞至含10％胎牛血清的DMEM培养基 中进行传代培养，接种密度如下： 6孔板：0.5x106细胞 10cm培养皿：4.0x106细胞 15cm培养皿：9.0x106细胞

2、转染

转染前将所有试剂置于室温。

2.1质粒DNA的稀释

在无菌试管中，用无血清的DMEM W / O酚红培养基（浓度为10％）稀释质粒DNA（ug）。病毒包装体（psPAX2）：病毒包膜（pMD2G）和重组质粒DNA的稀释比例分别为4:2:1。

6孔板：200ul+3ug的DNA10cm培养皿：1ml+7-8ug的DNA15cm培养皿：2ml+11-12ug的DNA 2.2 转染复合体形成

将PEI（1ug/uL）加入已稀释的总DNA中，PEI与DNA（ug）的混合比率为3:1。加入后立即涡旋混合。

6孔板：9ul PEI复合体（1ug/ul）=9ug10cm培养皿：21ul PEI复合体（1ug/ul）=21ug15cm培养皿：33ul PEI复合体（1ug/ul）=33ug将添加到细胞的DNA/ PEI的混合物在室温下孵育15分钟。

4、收获转染细胞

转染后48小时内收获转染细胞/或病毒上清。试剂的配制：PEI（1ug/ul） polysciences（CAT＃23966-2配制成储液：)1、将无内毒素的无菌水加热至80℃左右溶解PEI，冷却到室温。2、调整pH值至7.0，用0.22um的滤器过滤消毒，分装后储存在-20℃。工作液可保持在4℃

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23966-2

POLYETHYLENIMINE LINEAR

6720

2 g

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友情提醒：Polyethylenimine, Linear (MW 25,000) 23966-2为Polysciences公司生产的化合物产品，每批产品出厂前都经过严格的检测,保证每批产品都100%合格、稳定且高品质,但由于作为转染试剂使用过程中有很多实验室因素(PH,水纯度,称量的准度,dna纯度 )造成溶解出现问题或者转染效率出现差异,所以厂家只受理该产品纯度，分子量及重量缺失破损等相关投诉，针对极个别客户溶解问题和转染效率问题我们只能友善解决,所以不能保证您能获得满意答复，对于产品应用方法的问题，不作为评价我们售后工作的依据。如果我们提供的PEI手册都无法解答您的问题,建议您可以多看文献,多调整一下转染条件,找出适合自己细胞的转染方法。如果无暇摸索条件,您也可以直接购买我们EZ Trans细胞转染液,这样免去您很多烦恼,谢谢理解

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