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Polysciences公司23966-2停产,替代品23966-1

2017年年初,Polysciences公司就给各代理经销商邮件通知23966-2停产,替代品23966-1

23966-1跟23966-2的唯一区别就是重量不一样,由原来的2g装变成了现在的1g装,但是价格却涨了不少

目前蚂蚁淘现货充足,价格很好

PEI转染手册

转染操作流程:

1、细胞传代:

转染前24h内分离293T细胞至含10%胎牛血清的DMEM培养基中进行传代培养,接种密度如下:

6孔板:0.5x106细胞

10cm培养皿:4.0x106细胞

15cm培养皿:9.0x106细胞

2、转染

转染前将所有试剂置于室温。

2.1质粒DNA的稀释

在无菌试管中,用无血清的DMEMW/O酚红培养基(浓度为10%)稀释质粒DNA(ug)。病毒包装体(psPAX2):病毒包膜(pMD2G)和重组质粒DNA的稀释比例分别为4:2:1。

6孔板:200ul+3ug的DNA

10cm培养皿:1ml+7-8ug的DNA

15cm培养皿:2ml+11-12ug的DNA

2.2转染复合体形成

将PEI(1ug/uL)加入已稀释的总DNA中,PEI与DNA(ug)的混合比率为3:1。加入后立即涡旋混合。

6孔板:9ulPEI复合体(1ug/ul)=9ug

10cm培养皿:21ulPEI复合体(1ug/ul)=21ug

15cm培养皿:33ulPEI复合体(1ug/ul)=33ug

将添加到细胞的DNA/PEI的混合物在室温下孵育15分钟。

4、收获转染细胞

转染后48小时内收获转染细胞/或病毒上清。

试剂的配制:

PEI(1ug/ul)Polysciences(CAT#23966-1配制成储液:)

1、将无内毒素的无菌水加热至80℃左右溶解PEI,冷却到室温。

2、调整pH值至7.0,用0.22um的滤器过滤消毒,分装后储存在-20℃。工作液可保持在4℃