脂质体方案方案说明常见问题解答参考此方案被推荐作为从冻干脂质制备脂质体的一般指南。我们的脂质体常见问题解答中解决了其他注意事项和常见故障排除点。在此处下载完整的脂质体协议：完整协议用于产品编号：L-xxxx，例如L-2118、L-1182、L-1618 等。方案建议将此方案作为从冻干脂质制备脂质体的一般指南。我们的脂质体常见问题解答中介绍了其他注意事项和常见故障排除点。将脂质溶解在氯仿中并以适当的比例混合。使用干燥氮气流或真空（例如 SpeedVac）从脂质混合物中蒸发氯仿。干燥的脂质混合物可在 –20 ºC 下储存长达 6 个月。将脂质混合物重新悬浮在环己烷中。如果混合物不完全溶于环己烷，则添加少量乙醇（环己烷体积的 1-2%）。不要使用过多的乙醇，因为 t存在过量乙醇时，溶液不会冻结。使用干冰冷冻环己烷溶液或在 –20 ºC 下冷冻 30 分钟至 1 小时，具体取决于所用环己烷的体积。快速将冷冻混合物置于高真空系统（冻干系统）中。一般来说，\"室内真空”系统对于这个过程来说不够强大。样品应保持冷冻状态直至完全干燥；如果样品开始解冻，要么是真空​​不够强，要么是乙醇含量过多。解冻的样品不会产生白色粉末，它可能会从小瓶中爆出或起泡沫。将样品留在真空系统中，直到样品完全干燥。当从真空中取出时，小瓶摸起来不会感到寒冷或闻到环己烷的气味。这会产生一种干燥的白色粉末，很容易悬浮在水中，干燥的脂质混合物可在 –20 ºC 下储存长达 6 个月。暂停水性缓冲液中的脂质混合物（缓冲液温度应高于相脂质的转变。参见脂质体常见问题解答）并让混合物在脂质转变温度以上水合 30-60 分钟（偶尔涡旋）。为了将水溶性化合物包封在脂质体中，遵循相同的方案，除了之前将化合物溶解在水性缓冲液中重构干脂质。外部化合物（未封装）可以通过凝胶过滤去除。注意另一种方法是跳过步骤 3-5，将蒸发氯仿产生的脂质膜重新悬浮到适当的水性缓冲液中。参见步骤 6。在应用于脂质之前，所有溶剂溶液都应恢复到室温。请在开始前阅读整个协议。在选择用于脂质体形成的脂质时，请考虑以下特性：相变温度、电荷、稳定性和来源。这些都会影响脂质包装、渗透性以及脂质体的处理和储存方式。一旦形成脂质体就可以储存在水溶液缓冲液中或作为冻干粉。储存在溶液中时的稳定性会受到许多因素的影响，包括 pH 值、温度和冷冻保护剂或抗氧化剂的添加。不应将脂质体与胶束混淆。脂质体由带有水核的脂质双层组成，而胶束则由带有脂肪酸核的脂质单层组成。它们在物理和功能上彼此不同。脂质体的大小范围从大约 30 纳米到 2 微米不等。脂质体大小最好通过动态光散射来测量，动态光散射可以提供脂质体群体的平均大小以及分布的均匀程度。脂质体的大小和完整性可能会受到反复冻融的影响，因此要获得均匀的大小分布，最好使用超声处理或挤压。脂质体制剂的超声处理应在水浴中进行，温度高于脂质体中主要脂质的转变温度 f或最多 10 分钟。常见问题Echelon Biosciences 携带多种脂质，可用于在体外生成脂质体。更多详细信息，请参阅我们的脂质体常见问题解答。我应该如何储存我的脂质体？在水性缓冲液中重构的脂质体可以在 4C 下储存大约一周。缓冲液的 pH 值应保持在接近 7。应避免脂质体在水溶液中冻融，因为这会导致破裂和大小分布发生变化。影响脂质体稳定性的其他因素有哪些？水解降解是脂质产品的普遍问题。这种水解主要取决于 pH 值、温度、缓冲液种类、离子强度、酰基链长度和头基团以及聚集状态。不饱和脂质也比饱和脂质更容易氧化，因此饱和度更高的脂质将具有更高的稳定性。参考文献 Sundberg , E. 等人。 (2019) Syndecan-1 介导富含鞘磷脂膜的可溶性脂蛋白脂肪酶的分选ne 在高尔基体中。发育细胞第 51 卷，第 3 期，P387-398Acebron, I. 等。 (2020) 脂质膜粘着斑激酶激活的结构基础。 EMBO J 39:19Frank Szoka, Jr. & Demetrios Papahadjopoulos, (1980)，脂质囊泡（脂质体）的比较特性和制备方法。安。生物物理学家。生物工程, 9:467-508 购物车