产品工程细胞系CRISPRmod CRISPRa dCas9-VPR 稳定细胞系CRISPRmod CRISPRa dCas9-VPR 稳定细胞系

通过稳定表达 dCas9-VPR 细胞系简化 CRISPR 激活实验

从一系列产品中选择常见细胞系背景，然后只需提供 CRISPRa 引导 RNA 即可直接激活基因。

说明细胞培养支持数据资源

CRISPR 激活就绪细胞使用 Horizo​​n 自己的 CRISPRa dCas9-VPR 载体生成，带有杀稻瘟菌素抗性选择标记。QC 验证可确保dCas9-VPR 核酸内切酶的稳定表达和功能。细胞以每瓶 > 100 万个细胞的混合形式提供。

非常适合与其他 Horizo​​n 产品一起使用

对于单个基因激活实验和功能获得研究，请使用 CRISPRa 合成 crRNA 或慢病毒 sgRNA。对于筛选项目，请参阅我们预定义的基因家族、可药物或全基因组CRISPRa合成 crRNA 筛选文库或使用我们的Cherry Pick 自定义文库工具构建您自己的 CRISPRa 文库。

有限使用协议

Horizo​​n Discovery 工程设计的所有细胞系均根据我们的有限使用标签许可条款购买。

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细胞培养基和细胞系维持技巧

细胞系背景Cat #Basal mediaSupplements传代培养技巧A549HD Cas9-001HD dCas9-VPR-001RPMI 164010% FBS1% Pen/Strep推荐分流比 - 1 :3 至 1:8 维持 6 x 103HCT-116HD Cas9-002HD dCas9-VPR-002RPMI164010% FBS1% 笔/链球菌推荐分流比 - 1:3 至 1:8 以 75-90% 汇合度分流培养物 JurkatHD Cas9-004RPMI164010% FBS1% Pen/Strep维持培养物在1 x 105和1 x 106细胞/mLK-562HD Cas9-005HD dCas9-VPR-005IMDM10% FBS1% Pen/Strep维持培养物在1 x 105和1 x 106细胞/mlLRKOHD Cas9-007RPMI164010% FBS1% Pen /Strep推荐分流比 - 1:3 至 1:12以 75-90% 汇合度分流培养物NIH/3T3HD Cas9-010DMEM、高葡萄糖、GlutaMAXTM10% FBS1% Pen/StrepSeed 3-5 x 103 个细胞/cm2 在 80% 汇合度或更低时分割培养物不允许培养物汇合HAP1HD Cas9-011HD dCas9-VPR-011IMDM10% FBS1% Pen/Strep 建议分割比 - 1:10 - 1:15不允许细胞保持高密度，最大密度：75% 汇合度U2OSHD Cas9-012HD dCas9-VPR-012DMEM，高葡萄糖10% FBS1% 丙酮酸钠1% Pen/Strep 建议分流比 - 1:3 至 1:6 在 75-90% 汇合度下分流< /p>

在表达 dCas9 的稳定细胞系中使用 CRISPRa 合成 crRNA:tracrRNA 进行高效转录基因激活

贴壁 dCas9-VPR 稳定细胞系以 10,000 个细胞/孔铺板，并使用 DharmaFECT1 或 DharmaFECT4 转染试剂与合成 crRNA:tr 库进行反向转染acrRNA(25 nM) 靶向人类 TTN（目录号 U-009100-01-XX）。转染后72小时收获细胞并使用RT-qPCR测量相对基因表达。使用 GAPDH 作为管家基因，通过 Cq 方法计算相对转录激活倍数，并标准化为非靶向对照（目录号 U-009500-01-XX）。

悬浮 K562 dCas9-VPR 稳定细胞使用 100,000 个细胞/孔和 Lonza 缓冲液 SF 以及靶向人 TTN（目录号 U-009100-01-XX）的合成 crRNA:tracrRNA (25 nM) 库对细胞系进行电穿孔。转染后72小时收获细胞并使用RT-qPCR测量相对基因表达。使用 GAPDH 作为管家基因，通过 Cq 方法计算相对转录激活倍数，并标准化为非靶向对照（目录号 U-009500-01-XX）。

分析证书HD dCas9- VPR-001 42335 01 CoAHD dCas9-VPR-002 42337 01 CoAHD dCas9-VPR-005 42343 01 CoAHD dCas9-VPR-011 42353 01 CoAHD dCas9-VPR-012 42355 01 CoAHD dCas9-VPR-014 42359 01 CoAQuick 方案CRISPRmod 合成向导 RNA 转染方案，用于 dCas9-VPR 或 dCas9-SALL1-SDS3 表达细胞技术手册Cas9 和 dCas9-VPR 稳定细胞系 - 技术手册