高通量免疫检测技术蛋白质芯片是一种高通量的蛋白质免疫检测分析技术，可以简单的理解为多重ELISA检测技术。但是不同于ELISA的是，它一次试验可以检测几百种目标因子，且只需10-100ul的样品。抗体芯片是蛋白质芯片中的主要类型，抗体芯片是将多种不同的捕获抗体印制在固相支持物上，每种抗体孤立成点，抗体之间不相互影响，呈方阵排列。最终得到芯片结果图片，通过软件提取图片荧光值或灰度值，得到芯片数据，根据数据来比较目标因子信号差异和定量检测目标因子含量。蛋白质芯片的原理蛋白质芯片的检测原理主要是基于抗原抗体特异性非共价结合。蛋白质芯片目前采用的检测方法主要有双抗体夹心法检测和样品标记法检测。夹心法抗体芯片是将捕获抗体预先固定在固相载体上，生物样品加入到芯片上一起孵育反应后，其特异性的抗原与捕获抗体结合，然后加入生物素标记的检测抗体一起孵育，最后通过HRP-链霉亲和素与化学发光底物、或者荧光染色剂-链霉亲和素结合作为信号检测。基于 三明治 双抗体夹心法建立的芯片，高品质的抗体对是此方法的关键，夹心法有很高的灵敏度，检测浓度可以低至1-10 pg/mL;每增加检测一个蛋白，芯片上就需要增加一个抗体对，这样可能出现交叉反应，因此需要将每个抗体对与芯片上其他抗体对进行检测，验证是否可以引入这个抗体对，且不对其他抗体对检测造成干扰，通过优化筛选将交叉反应降到最小。蛋白质芯片的优势1.样品处理简单：可以直接用粗生物样品（血清、血浆、尿、体液等）进行分析，只需经过离心处理即可；2.样品用量少：可以低至10 l-100 l样品检测；3.高通量：一个样品一次试验可以检测多种因子(高达成百上千种)，同时快速的发现多个生物标记物，且几天可以完成上千个样品的检测；4.特异性和灵敏度高：单克隆抗体芯片特异性高，可鉴定未知抗原/蛋白质，以减少测定蛋白质序列的工作量，且蛋白芯片的灵敏度高可以发现低丰度蛋白质及生物标志物；5.可以测定疏水蛋白质：与 双相电泳加质谱 相比，除了有相似功能外，并可增加测定疏水蛋白质的表达和功能；6.集成性：在同一系统中集发现和检测为一体；7.可定量检测：结合至芯片上的抗体通过标准曲线来对测定抗原进行定量，但一般飞行质谱不用于定量分析；8.替代和互补传统检测方法：利用抗体芯片, 可替代 Western Blot；利用定量抗体芯片，可替代ELISA定量检测；抗体芯片可以互补流式细胞仪不足的功能，如将细胞溶解，可测定细胞内的抗原，而且灵敏度远高于流式细胞仪；9.性价比高：利用定量芯片一次性检测大量目标因子，平均定量每个因子所需的价钱远比ELISA便宜。蛋白质芯片的分类根据原理：夹心法芯片、标记法芯片、竞争法芯片根据载体：玻片芯片、膜芯片、96孔板芯片根据性能：定量芯片和半定量芯片根据种属：人类抗体芯片、小鼠抗体芯片、大鼠抗体芯片、猪抗体芯片、猴抗体芯片根据检测目标：细胞因子（Cytokine) ；抗体芯片凋亡因子（Apoptosis）；抗体芯片肥胖因子（Adipokine)；抗体芯片 血管生成因子（Angiogenesis）；抗体芯片炎症因子（Inflammation）；抗体芯片动脉粥样硬化抗体芯片（Atherosclerosis）；趋化因子（Chemokine)；生长因子（Growth factor）抗体芯片；基质金属蛋白酶（Matrix Metalloproteinase)抗体芯片；白介素（Interleukin)抗体芯片；磷酸化（Phosphorylation）抗体芯片；急性肾损伤(Acute Kidney Injury)抗体芯片适用于样品类型血清、血浆、细胞培养上清、细胞裂解液、组织裂解液；除了这些常见的样品，全世界客户使用RayBiotech抗体芯片产品检测成功的特殊样品还有尿液、眼泪、唾液、痰、脑脊液、前列腺液、腹腔注射液、奶水、初乳、支气管肺泡灌洗液、脓肿液、中耳液、血小板释放物、骨头裂解液等。样品的收集方法血清：收集全血至普通离心管或者采血管（BD vacutainer公司的红头真空采血管，不含抗凝剂、防腐剂或者分离剂）,4℃放置30-45min, 以3000-5000rpm/min离心10min, 取上清检测或者冻存（-20或-80℃）。血浆:收集全血至BD vacutainer公司的EDTAK2、肝素锂、或者枸橼酸钠等真空采血管，以3000-5000rpm/min离心10min, 取上清检测或者冻存（-20或-80℃）。尿液：收集不添加稳定剂的尿液样本，高速离心样本(如：10000 rpm离心 5min 或5000 rpm离心10 min)，取上清分装，利用干冰或甲醇浴使样本迅速结冻，储存于-80℃备用。细胞上清（条件培养基）：血清中含有部分细胞因子，所以最好制备无血清或低血清条件培养基。在第0天,于100mm培养皿中加入完全培养基，然后接种1X106个细胞，培养第3天，倒掉培养基，加入6-8ml低血清培养基(如含有0.2%牛血清的培养基)；第5天，收集低血清的培养基于15ml离心管中，2000rpm、4℃离心10min，收集上清，分装于1.5ml EP管中，储存于-80℃中，可以保存1年以上。不同细胞可根据生长状况确定培养时间。1.半定量和定量芯片的差异？1）检测原理和载体的不同：半定量芯片目前有夹心法和标记法半定量芯片，且载体有膜的和玻片的。定量芯片目前只是采用夹心法，且载体只有玻片。2）抗体阵列的数量：定量芯片底部没有barcode(即白色的条码),且16个孔每个孔都点有抗体阵列，而半定量芯片一般都是上半部分8个孔点有抗体。3）抗体重复点：定量芯片每个点都是4个重复点，半定量芯片是2个重复点。4）检测性能的差异。2.膜芯片都有哪些方法对结果进行拍照？1）化学发光成像系统拍照；2）胶片曝光成像；3）比色法成像；4）红外扫描法成像3.玻片芯片都有哪些仪器可以扫描结果？一般来说，大多数基因芯片扫描仪都可以使用，只要具有一个Cy3标记（绿色）通道和 20 m的像素分辨率，并能够扫描标准大小的玻片即可。4.定量芯片试剂盒中玻片的数量，规格，可以检测几个样品？一般定量芯片试剂盒的规格有1张，2张，4张玻片的规格；1张玻片上可以做8个孔的标准曲线，其余8孔可以检测样品；对于2张玻片，可以每张玻片都做标准曲线，这样2张玻片就可以检测16个样品；或者2张玻片同时操作，保持所有条件一致，可以在第一张玻片上只做一个标准曲线，从第二张玻片上每张玻片上做一个空白control和一个阳性质控(可选用standard3)其余孔可以用于检测样品。操作步骤已发表文献更多产品咨询，请联系上海前尘生物科技有限公司 4006-111-883