C57
小鼠心肌细胞培养
参加人员：王朗
郭源源
一、培养前准备：
1
器械：
取心脏：
wpi
剪
2
把、显微镊弯
2
把、眼科镊
1
把
取心脏后：显微剪
1
把、持针器
2
把、吉利刀片
2
片、眼科镊
2
把、
400
目细胞滤网
2
器皿：
外：烧杯
1
个
100ml
内：盛酒精小烧杯、棉签
2
包，鼠板盛小鼠尸体，玻璃皿
100mm2
，
碎冰盆底加两个冰袋，
离心管架
1
，
6
孔板，
EP
管，
15ml
离心管，
50ml
离心管
3
试剂及配制
1.
培养基：
DMEM/F12
，添加
15%FBS
2.
提前融化：
BrdU
溴脱氧尿苷
100X
储备液
(10mM)
，小牛血清、
II
型
胶原酶（
10mg/ml
储备液）、
0.25%
胰酶提前融化
3.D-Hanks
液：
4.
酶消化液：酶终浓度：
2
型胶原酶
0.5mg/ml
，胰酶
0.15mg/ml
40ml
：胰酶
1.2ml
，胶原酶
2ml
，
D-HANKS36.8ml
二
方法
1
心脏取出
1.
加
10ml
和
6ml
未加血清的
DMEM/F12
到
2
个
100mm
皿中，平皿
放入冰盆预冷。
2.
将
20
只小鼠婴放入
100mm
玻璃平皿，
镊取小鼠放入
75%
酒精中浸
泡数秒，对其颈部以下消毒，抓取小鼠，固定住上肢与下肢，从颈部
剪下头部，剪刀由颈部伸入胸腔沿胸骨左侧剪开，轻轻挤压胸廓，让
心脏跳出，迅速用镊子取下心脏，放入盛有
10ml
DMEM/F12
的玻璃
平皿中。
3.
轻柔清洗心脏的血液后转入另一个盛有
10ml
DMEM/F12
液的
10cm
培养皿中，用显微剪将心脏剪成
1-2mm
的碎片。
4.
以上过程应在冰上
30min
之内完成。
2
消化细胞
1.
将剪碎的组织转入
15ml
离心管，吸去
DMEM/F12
，加入酶消化液
4ml
。
2.
37
度水浴中轻摇，消化
10min
，静止数秒钟，吸取上清液，弃去。
此时消化下的细胞为不需要的红细胞、细胞碎片以及心内膜和心外膜
细胞。
