从豚鼠胰腺组织分离细胞，用纱布或尼龙网过滤细胞悬液，将过滤的细胞悬液轻轻加于BSA液上面。通过3次连续离心和混悬细胞，使呈团状的细胞分散。然后，将细胞接种于涂有胶原蛋白的培养器皿。

材料1.无菌（1）F12K组织培养液：含有20%小牛血清（F12K-CS20)

​（2）HBSS

（3）HBSS-DVC:不含Ca²⁺和Mg²⁺的HBSS

（4）葡萄糖（Difco,0155-174,BDBiosciences)

（5）胰蛋白酶液：用枸橼酸缓冲液配制0.25%胰蛋白酶液（1:250,Difco,BDBi-osciences)。枸橼酸缓冲液（pH7.6)含有3g凡枸橼酸三钠盐、6g/LNaCl、5g/L葡萄糖和0.02g/L酚红。

（6）胶原蛋白酶液：1800U/ml，用1XHBSS-DVC(pH7.2)溶解胶原蛋白酶(Gibco)。调整胶原蛋白酶液的pH至7.2，在4℃条件下用12Kda透析膜透析4h，透析液为含有0.2%葡萄糖的HBSS-DVC。除去HBSS后，用HBSS-DVC重复此步骤16～18h。过滤除菌，分装成10～20ml，在70℃以下的条件下储存。

（7）25ml硅化锥形瓶（Bellco)

（8）吸管：5或10ml,大口径（Bellco)

（9）Blichner漏斗 

（10）透析管（SpectroPor)

（11）Sidearm瓶:250ml

（12）聚丙烯离心管：50ml

（13）纱布 

（14）涂有胶原蛋白的培养皿（Biocoat，BDBiosciences)2.非灭菌（1）水浴振荡器（M5B型，11-22-1，Backer)

（2）离心机操作步骤1.配制胶蛋白原酶和胰蛋白酶（1:2)混合消化液，加热至37°C。

2.在无菌条件下取出整个胰腺（0.5～1g)，放人F12K-CS20中。

3.剪除肠系膜和其他组织，将胰腺切成1～3mm小块。

4.将组织块移人盛有5ml预热的混合消化液的25ml硅化锥形瓶，在37℃条件下用水浴振荡器振荡消化（120r/min,15min)。加人新鲜消化液，重复此步骤2～3次，直至大部分组织被消化分散。

5.每次振荡消化后，使大的组织块沉下，然后将上清液移入50ml聚丙烯离心管。离心管盛有约12ml冷F12K-CS20,以中和消化液。

6.离心（600r/min，5min)后，用5～10ml冷F12K-CS20混悬细胞，将离心管放在冰上。

7.收集细胞悬液，经数层灭菌纱布（放人Blichner漏斗内）过滤。在过滤过程中，将漏斗柄插入真空瓶，轻轻吸细胞悬液。取少量细胞悬液，做定量分析。

8.通常情况下，每毫克组织获得1X10⁵～2X10⁵个细胞，90%～95%细胞为活细胞。

9.将5X10⁷～5X10⁸个细胞加到2～4个50ml聚丙烯离心管的液柱表面，每个离心管内盛有35ml添加4%冷BSA的HBSS-DVC(pH7.2)。然后，离心(600r/min，5min)。此步骤对于有效地将胰腺的腺泡细胞与胰岛细胞、导管细胞和基质细胞分离是至关重要的。吸取上清液，重复此分离步骤2次，每次分离后收集细胞，用冷F12K-CS20混悬细胞。

10.用5～10ml冷F12K-CS20收集细胞。取少量细胞悬液，计数细胞。每毫克组织获得2X10⁴～5X10⁴个细胞，80%～95%细胞为腺泡细胞。接种密度为3X10⁵个细胞/cm²。在72h内，细胞贴壁，形成克隆。