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凝胶迁移滞后实验(electrophoretic mobility shift assays,EMSA)基本原理

凝胶迁移滞后实验(electrophoreticmobilityshiftassays,EMSA)是近年发展起来的研究核酸与蛋白质相互作用简单、快速、敏感的方法。目前已经成为转录因子研究的经典方法。其基本原理是蛋白质可以与末端标记的核酸探针结合,电泳时这种复合物比无蛋白结合的探针在凝胶中泳动的速度慢,即表现为相对滞后(如下图所示)。该方法可用于检测DNA结合蛋白、RNA结合蛋白,并可通过加入特异性的抗体(supershift)来检测特定的蛋白质,并可进行未知蛋白的鉴定。

简单说明以下EMSA技术的优缺点,基本原理和实验方法。Electrophoreticmobilityshiftassay(EMSA)IntroductionAdvantage:canseparatedifferenttypesofcomplexes,suchasmonomeranddimer=>betterthanfilterbindingeasiertoseethecomplexthanfootprintassayDisadvantage:donotknowwherethebindingsiteis.RationaleDNA-proteincomplexwillhaveasmallermobilitythanthatoffreeDNAonnativegelgelelectrophoresisandmolecularsievecageeffect-differencebetweenfootprintandEMSADatainterpretationnonspecificbindingsmearingbetweenDNAandcomplexbandsMethodsLableDNAMixDNAandproteintoformcomplexAddnonspecificcompetitorSeparatecomplexwithfreeprobeonanativegel