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核酸检测方面NanoDrop one与Qubit 4的区别

问:我测浓度的时候用的是Nanodrop,两个样品均达到了贵公司的样品要求,可是您测了之后尤其是实验组浓度太低了!我看了你们的方法,估计你们的方法测出来要准确一些吧!         


答:老师的检测方法为Nanodrop分光光度计检测DNA的浓度和总量:该检测方法原理为核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键系统,能吸收紫外光,RNA和DNA的紫外吸收峰在260nm波长处。一般在260nm波长下,每1ml含1µg RNA溶液的光吸收值为0.022~0.024,每1ml含1µg DNA溶液的光吸收值约为0.020,故测定未知浓度RNA或DNA溶液在260nm的光吸收值即可计算出其中核酸的含量。此法操作简便,迅速。若样品内混杂有大量的核苷酸或蛋白质等能吸收紫外光的物质,则测光误差较大,故应设法事先除去。NanoDrop及其它紫外分光光度计均采用紫外吸光度进行检测,它无法区分出DNA、RNA、降解核酸、游离核苷酸及其它杂质。尽管紫外吸收定量法是最常用的一种DNA或RNA定量方法,但其读数并不可靠且不准确,不能用于后续建库的参考;

 


而我们对DNA浓度的检测以及定量方法为Qubit荧光计检测的:Qubit荧光计是新一代核酸和蛋白定量仪,实验台上可以对DNA和RNA进行精准定量,它可以采用荧光染料检测特定目标分子的浓度。它采用专门研制的荧光检测技术,该技术采用只有与DNA、RNA或蛋白质结合后才发出荧光的Molecular Probes® 染料。这些荧光染料只有与特异性的靶分子结合时,才能发出荧光信号,即使有游离核苷酸或降解核酸存在时亦是如此。由于Qubit®技术只检测靶分子(而不是污染物)的浓度,因此这种特异性可以获得十分精确的结果,这对我们后续的精确建库过程是很必要的;