Lexogen公司TeloPrime Full-Length cDNA Amplification Kit - 可实现高精度的转录起始位点作图
TeloPrime Full-Length cDNA Amplification Kit TeloPrime Full-Length cDNA Amplification Kit是基于Lexogen公司独有的帽状结构依赖性接头连接反应(Cap-Dependent Linker Ligation,CDLL)和长链反转录技术,对有帽状结构和poly(A)结构的全长RNA分子具有高度的选择性。通过获得完整的mRNA信息,TeloPrime为mRNA转录组提供了一个准确可靠的表述。
工作流程: 全长cDNA的合成起始于oligo dT始发的总RNA的长链反转录反应。之后,具有5端C突出结构的双链接头与RNA/cDNA杂交双链的帽状结构的反向的G碱基形成非典型的碱基配对。通过使用双链特异性的连接酶,使得连接反应仅在两种情况下发生:当帽状结构存在时(如完整的RNA)和当反转录反应真的到达mRNA 的5端时。因此,只有存在5标签的产物在第二链合成中延伸,全长双链cDNA在PCR反应中使用5和 3标签特异性PCR引物进行扩增。 优势: § 对全长cDNA合成具有特异性的特殊5-帽状和poly(A)尾状结构 § 灵活的RNA投入量 (1 ng - 2 μg oftotal RNA / prep) § 一体化(all-in-one)的操作流程 § 反转录反应,可替换为定制引物的PCR正、反向引物 (例如基因特异性的引物) § 多种下游应用,例如NGS文库构建 (包括Pacific Biosciences),微阵列探针的生成, RACE,克隆和标准化
性能:与其它制备全长cDNA的方法例如Template Switch和Oligo Capping相比,TeloPrime法制备的全长cDNA具有出众的5帽覆盖面积,使得转录起始位点作图具有高度精确性。 图1 | TeloPrime工作流程的原理概述
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图2 | Lexogen公司的TeloPrime Full-Length cDNA Amplification Kit可以实现高精度的转录起始位点(TSS)作图。在mRNA测序实验中,mRNAs的5末端用Template Switch,Oligo Capping或Teloprime的CDLL技术进行标记。TSS被定位到小鼠基因组上,绘制出累积的TSS阅读覆盖度(read coverage)与标准化注释的转录物长度对应的曲线图,用来表示与前500个表达基因相关联的TSS基因图谱。
产品名称 规格 货号 价格(元) TeloPrimeFull-Length cDNA Amplification Kit 8 preps 013.08 7,425 TeloPrimeFull-Length cDNA Amplification Kit 24 preps 013.24 16,875
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