杨帆;刘艾林;杜冠华【期刊名称】《药学学报》【年(卷),期】2012(047)006【摘要】建立流感病毒神经氨酸酶(NA)活性测定和酶抑制剂评价标准方法,并评价其准确性、稳定性.确定标准方法为:在96孔板内加入样品Vsam=10μL、酶溶液VNA=30μL、底物Vsub=60μL,混匀,37℃反应1h,用NaOH终止反应,测定荧光强度.定义该反应条件下1h内反应生成1nmol4-MU的NA酶量为一个活性单位.对测定结果,引入不确定度考察其准确性和稳定性.酶活性抑制率的合成相对不确定度为6.51×10-2,连续10天测得的活性化合物奥司米韦酸抑制活性结果稳定.本研究系统评价了NA抑制活性测定方法,为其在新药发现中的应用提供了实验依据,并探讨了对生物学指标测定的不确定度评价.%Inpresentstudy,standardmethodandstandardoperationpracticeformeasuringtheactivitiesofinfluenzaneuraminidaseanditsinhibitorshavebeenestablished.Theaccuracyandstabilityofthemethodhasbeenevaluated.Standardoperationisasfollowing:10μLsample,30μLneuraminidaseand60μLsubstrateareaddedtoonewellofa96-wellplate,andthenincubatedat37℃for1h.ThereactionwasstoppedwithNaOHbeforefluorescenceintensitydetermination.Oneunitofneuraminidaseisdefinedastheamountofenzymethatproduces1nmol4-MUin1hunderaboveconditions.Theinhibitionaccuracyisindicatedbyanuncertaintymeasurementof6.51×10-2,anditsstability