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제품특징
□ 농도 1~3 U/㎕
□ 형상
20 mM | Tris-HCl (pH8.0) |
100 mM | NaCl |
5 mM | CaCl2 |
5 mM | MgCl2 |
1 mM | EDTA |
50% | Glycerol |
□ 보존 -20℃
□ 첨부 Buffer 조성 (5×)
40 mM | Tris-HCl (pH8.0) |
1,200 mM | NaCl |
24 mM | CaCl2 |
24 mM | MgCl2 |
2 mM | EDTA |
□ 기원
Alteromonas espejiana BAL31
□ 제품설명
본 효소는 해양성 세균 A. espejiana BAL31가 균체외로 생산하는 단일가닥 DNA 특이적인 endonuclease이지만, 단일가닥 DNA가 없으면 이중가닥 DNA에 작용하여 양말단으로부터 동시에 분해하는 5’→ 3’, 3’→ 5’ exonuclease 활성(trimming 활성)을 나타낸다. 최종 산물은 5’-P mononucleotide이다. 본 효소는 분자량 약 83 kDa의〔F〕형과 분자량 약 73 kDa의〔 S〕형이 존재하며,〔 F〕형이 exo/endo의 활성의 비가 10~20배 높다. 두 형에는 exonulcease 활성이 상대적으로 다른것 이외는 반응조건 등의 차이는 확인되지 않는다. BAL31은 F형을 주로하는 S형 nuclease와의 mixture이다.
□ 활성의 정의
열변성 송아지 흉선 DNA를 기질로 하여 30℃, pH8.0의 조건에서 1분 동안 1 ㎍의 가용성 분해물을 생성하는 효소활성을 1 U으로 한다.
□ 활성 측정용 반응액 조성
20 mM | Tris-HCl (pH8.0) |
600 mM | NaC |
12 mM | CaCl2 |
12 mM | MgCl2 |
1 mM | EDTA |
650 ㎍/ml | 기질 DNA |
□ 사용상의 주의
- 단일가닥 DNA endonuclease 활성은 반응온도를 30 → 20℃로 낮추면 1/10 정도까지 떨어지나, dsDNA exonuclease 활성의
잔존은 1/3 정도이다.- Endonuclease 활성은 염농도에 영향받지 않으나 exonuclease 활성은 염농도가 높을수록 저하한다.- Trimming 활성의 최적염농도는 200 mM NaCl 부근으로 이보다 낮으면 무작위적으로 분해할 수 있다.- 분해활성은 염기에 대한 의존성이 높고 GC-rich인 영역(특히 Sma I site)은 분해되기 어려우므로 말단의 제한효소 site를 선택할
필요가 있다.- 반응은 distributive 효소 농도에 의존성이 높고 희석에 대해 직선적 상관은 나타내지 않으며, 효소반응이 너무 빠른 경우는
효소량을 줄이는 것보다는 반응 온도를 낮추는 것이 바람직하다.- 본 효소에 의해 생긴 말단의 평활화율은 10% 정도로 낮고, 라이게이션 효율을 높이기 위해서는 T4 DNA polymerase에 의한
말단의 수복이 필요하다.
□ 용도
- DNA 단편의 양말단에서의 부터의 한정분해 (결실의 제작) (결실의 길이가1,000염기 정도가 적당하다. 그 외의 경우는 Exonuclease III와 S1 nuclease의 조합으로 하는 것이 좋다.)
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全能干细胞具有能发育成各种组织器官的完整个体的潜能的细胞,如胚胎干细胞。多能干细胞没有发育成完整个体的能力,但具有分化出多种细胞组织的能力,主要在器官再生、修复和疾病治疗方面极具应用价值,多能干细胞还在研究当中,过去认为多能干细胞只能从人胚胎中获得,现在已能用体细胞转化为多能干细胞。
单能干细胞只能向一种类型或密切相关的两种类型的细胞分化,如上皮组织基底层的干细胞、肌肉中的成肌细胞。
心肌梗死(Myocardialinfarction,MI)特征是心脏供血减少和心肌功能减弱,成人心脏的自我再生能力有限,使得心肌梗死的状况雪上加霜。由于干细胞具有自我更新复制能力和分化潜能,因此干细胞移植是使心脏组织再生和增强心脏功能的新的方法。最近的研究表明脂肪组织来源干细胞(ADSCs),即从脂肪组织分离的多能干细胞,具有广泛的分化潜能,可分化为心肌细胞。现分享一篇DNA转染(Entranster-H4000)与脂肪来源干细胞和心肌梗死研究的文献,以供参考。
Real-timetrackingofADIposetissue-derivedstemcellswithinjectablescaffoldsintheinfarctedheart.pdf(866.54k)
(2) 与此相反,Dr. Gearheart从终止妊娠的胎儿组织中分离出多能性干细胞。捐献者自行决定了终止妊娠,从他们那儿获得了知情同意书后,Dr. Gearheart从原本要发育成睾丸或卵巢的胎儿部位取得细胞。尽管Dr. Thomson 实验室和Dr. Gearheart实验室使用的细胞系来源不同,但发育成熟的细胞看起来非常相似。
体细胞核转移(SCNT)是得到多能性干细胞的另一种途径。在SCNT的动物研究中,研究者将一个正常的动物卵细胞去除细胞核(含染色体的细胞结构)。存留在卵细胞内的物质含营养成分和对胚胎发育非常重要的能量物质。而后,在非常精细调控的实验室条件下,将单个体细胞——除卵细胞或精子细胞之外的任一种细胞——与除去核卵细胞放在一起,使两者相融合。融合细胞以及其子细胞具有发育成一个完整个体的潜能,因此是全能性的。正如图I所示,这些全能性细胞不久将形成胚囊,从理论上来说,可利用胚囊的内细胞群来建立多能性干细胞系。实际上,任何一种可生成人类胚囊细胞的方法都有可能成为人体多能性干细胞的来源。
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