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Sporulation and Dissection of Yeast a/alpha Diploids

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LindaHoskins

LastModifiedTue,Nov6,2001

TheseconditionsworkwellfortheHieteryeaststrains

1.Isolatediploidcolonies.Inoculate2mlYPD+Adewithasingle,largediploidcolonyandgrowO/Nat30degreesCtostationaryphase.

2.Put200ulofstationaryphasecellsinto5mlsterile,distilledH2O.Spindown2min.inclinicalcentrifuge.Washagainwith5mlH2O.

3.ResUSPendin2ml0.5%(50mM)KOAc(pH7.0)+0.5XnutrientsforauxotrophicMarkers(usuallyAde,Ura,Trp,Leu,His,Lys,Met).

4.Incubateontuberolleratrm.temp.for3-7days.

5.Checkforsporulationundermicroscope.Spindowntetradsinasmallglasstubeandwash3timeswith5mlsterileH2O.Resuspendin2mlH2O.

6.Spindown180ulcells.Resuspendin90ulZymolyase,0.5mg/mlin1Msorbitol.Incubateat30degreesfor5-10minutes.

7.Slowlyadd0.3mlH2Oonicetostopthereaction.

8.Plate30ulcellsontoYPD+Ade,Trp,Uraanddissect.

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发布于： 2021-09-15 阅读（163）

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