Product Name | VIP, human, porcine, ratHSDAVFTDNYTRLRKQMAVKKYLNSILN - NH2 |
Size | 0.5 mg |
Catalog # | AS-22872 |
US$ | $73 |
Purity | % Peak Area By HPLC ≥ 95% |
28-amino acidneuropeptide VIP (Vasoactive Intestinal Peptide) is a neurotransmitter and a neuromodulator. VIP is broadly distributed in the peripheral and central nervous systems. It has an amino acid sequence identity of 68% with pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide (PACAP). VIP and PACAP inhibit TNF-a, IL-1ß, IL-6, and NO production by lipopolysaccharide (LPS)-activated microglia. Both regulate the production of proinflammatory factors at a transcriptional level by inhibiting p65 nuclear translocation and nuclear factor-kB-DNA binding. As well, VIP relaxes the smooth muscle of the respiratory, gastrointestinal and reproductive tracts, stimulates exocrine and endocrine secretion, increases the survival time of neurons, and promotes the proliferation of untransformed and cancer cells. | |
Detailed Information | DatasheetMaterial Safety Data Sheets (MSDS) |
Storage | -20°C |
References | Paul, S. et al. J Biol Chem 276, 28314 (2001)Paul, S. et al. J Biol Chem 266,16128 (1991)Delgado, M. et al. J. Leukocyte Biol 73, 155 (2003)Yamamoto, K. et al. Diabetes 52, 1155 (2003)Ganea, D. Cell Mol Biol (Noisy-le-grand) 49, 127 (2003)Poso, D. and M. Delgado, FASEB J 18, 1325 (2004)Romano, D. et al. J Biol Chem 278, 51386 (2003). |
Molecular Weight | 3325.9 |
HSDAVFTDNYTRLRKQMAVKKYLNSILN-NH2 | |
Sequence(Three-Letter Code) | H - His - Ser - Asp - Ala - Val - Phe - Thr - Asp - Asn - Tyr - Thr - Arg - Leu - Arg - Lys - Gln - Met - Ala - Val - Lys - Lys - Tyr - Leu - Asn - Ser - Ile - Leu - Asn - NH2 |
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1.欲冷冻保存之细胞应在生长良好(log phase) 且存活率高之状态,约为80 – 90 %致密度。
2. 冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质,例如hybridoma 应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。
3. 注意冷冻保护剂之品质,冻存液:10%DMSO+90%FBS,我做细胞试验从不加双抗,NAHCO3-未加
4. 冷冻保存的细胞浓度:
冻存方法
1.冷冻前一日前更换半量或全量培养基,观察细胞生长情形。
2.收集培养之细胞,取少量细胞悬浮液(约0.1 ml) 计数细胞浓度及冻前存活率。 离心速度不要大于1000rpm/min或800g/min。
3.离心弃上清,加入适量冷冻保存溶液,使细胞浓度为1-5 x 106 cells/ml,混匀,分装于无菌冻存管中,1 ml/vial,悬浮细胞可以浓一些。
4.冷冻保存方法1: 冷冻管置于4 oC 10 分钟→ -20 oC 30 分钟→ -80 oC 16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vapor phase 长期储存。 或4 oC 1h→ -20 oC 1h→ -80 oC 1h(或隔夜) → 液氮槽vapor phase
最常见的我的k562细胞就是这样做的。
阳离子脂质体法 :稳定转染,瞬时转染,所有细胞使用方法简单,可携带大片段DNA,通用于各种类型的裸露DNA或RNA,能转染各种类型的细胞,没有免疫原性。虽在体外基因转染中有很高的效率,但在体内,能被血清清除,并在肺组织内累积,诱发强烈的抗炎反应,导致高水平的毒性,这在很大程度上限制了其应用。
阳离子聚合物 :稳定转染,瞬时转染,所有细胞。除了具有阳离子脂质体的转染效率高,操作简单,适用范围广,重复性好等特点外,还具有在体内,转染效率高,细胞毒性低等特点,是新一代的转染试剂。
培养基:1640+10%FBS
消化条件: 预冷PBS浸泡5-10Min
细胞正常形态为圆形,贴壁生长,生长速度较快,细胞难消化,消化时用预冷的PBS淋洗,然后浸泡5min,让后用枪轻轻吹起吹散收集离心,这个过程很关键,如果没有消化到位就吹打或消化过久,细胞次日贴壁就会分化,分化之后的形态是细胞两端长出尖尖的触角,细胞不再圆形贴壁,而是平铺向四周扩散生长。
所以你换培养基试试看,我养的挺好的!
细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存,可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来,这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞,可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种,起到了细胞保种的作用。除此之外,还可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。 细胞冻存时向培养基中加入保护剂--终浓度5%.15%的甘油或二甲基亚砜(DMSO),可使溶液冰点降低,加之在缓慢冻结条件下,细胞内水分透出,减少了冰晶形成,从而避免细胞损伤。 采用"慢冻快融"的方法能较好地保证细胞存活。标准冷冻速度开始为-1 到 -2℃/min,当温度低于-25℃时可加速,到-80℃之后可直接投入液氮内(-196℃)。
我用bioteke的中量全血基因组DNA提取试剂盒(溶液型)提取冻存全血DNA:蛋白质沉淀液处理后上清呈褐色或淡红色,不是无色;在加入异丙醇后是褐色或淡红色絮状沉淀,不是白色絮状DNA沉淀。
我是参照试剂盒说明一步一步来的,请问这是什么原因?
是不是溶血啦,还是蛋白质没有沉淀完全,如何解决这一问题?
感谢啦!
吹打最好还是用弯头的,用起来更为方便
伤,有必要使用含有DMSO冷冻保护剂。 DMSO能够快速穿透细胞膜进入细胞中,降低冰点、延缓冻存过程, 同时提高细胞内离子浓度,
减少细胞内冰晶的形成,从而减少细胞损伤。深低温时二甲基亚砜的细胞毒性受到抑制。复苏时动作要快,尽快洗掉二甲基亚砜,否则会造成对细胞严重的毒性。二
甲基亚砜(DMSO)是目前最好的细胞冻存保护剂,但也是一种以细胞毒性很大的化学试验剂。研究结果表明,培养液中DMSO浓度为10%时,细胞生长抑制
率近100%;1‰浓度时抑制率为35%,即使是0.04‰的浓度,DMSO对细胞的生长也有不利的影响。
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