Fetal Bovine Serum can contain the antibiotic tetracycline (tet)and researchers using very sensitive tet-inducible geneexpression systems encounter problems with unintended expressionas a result. Serum containing minimal levels of tetracycline isneeded to ensure accurate gene expression.
This product is used in cell culture applications usingtet-inducible gene expression systems, and other applications inwhich the presence of tetracycline would prove disruptive. Thelimit of detection is approximately 0.001 µg/ml.
- Triple 0.1µm sterile-filtered
- Mycoplasma-tested and virus-screened
- Ships on dry ice. Store frozen at -20 to -10°C
*Single-unit price. For inquiries about this product,contact your sales representative.
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1.欲冷冻保存之细胞应在生长良好(log phase) 且存活率高之状态,约为80 – 90 %致密度。
2. 冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质,例如hybridoma 应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。
3. 注意冷冻保护剂之品质,冻存液:10%DMSO+90%FBS,我做细胞试验从不加双抗,NAHCO3-未加
4. 冷冻保存的细胞浓度:
冻存方法
1.冷冻前一日前更换半量或全量培养基,观察细胞生长情形。
2.收集培养之细胞,取少量细胞悬浮液(约0.1 ml) 计数细胞浓度及冻前存活率。 离心速度不要大于1000rpm/min或800g/min。
3.离心弃上清,加入适量冷冻保存溶液,使细胞浓度为1-5 x 106 cells/ml,混匀,分装于无菌冻存管中,1 ml/vial,悬浮细胞可以浓一些。
4.冷冻保存方法1: 冷冻管置于4 oC 10 分钟→ -20 oC 30 分钟→ -80 oC 16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vapor phase 长期储存。 或4 oC 1h→ -20 oC 1h→ -80 oC 1h(或隔夜) → 液氮槽vapor phase
最常见的我的k562细胞就是这样做的。
阳离子脂质体法 :稳定转染,瞬时转染,所有细胞使用方法简单,可携带大片段DNA,通用于各种类型的裸露DNA或RNA,能转染各种类型的细胞,没有免疫原性。虽在体外基因转染中有很高的效率,但在体内,能被血清清除,并在肺组织内累积,诱发强烈的抗炎反应,导致高水平的毒性,这在很大程度上限制了其应用。
阳离子聚合物 :稳定转染,瞬时转染,所有细胞。除了具有阳离子脂质体的转染效率高,操作简单,适用范围广,重复性好等特点外,还具有在体内,转染效率高,细胞毒性低等特点,是新一代的转染试剂。
培养基:1640+10%FBS
消化条件: 预冷PBS浸泡5-10Min
细胞正常形态为圆形,贴壁生长,生长速度较快,细胞难消化,消化时用预冷的PBS淋洗,然后浸泡5min,让后用枪轻轻吹起吹散收集离心,这个过程很关键,如果没有消化到位就吹打或消化过久,细胞次日贴壁就会分化,分化之后的形态是细胞两端长出尖尖的触角,细胞不再圆形贴壁,而是平铺向四周扩散生长。
所以你换培养基试试看,我养的挺好的!
细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存,可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来,这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞,可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种,起到了细胞保种的作用。除此之外,还可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。 细胞冻存时向培养基中加入保护剂--终浓度5%.15%的甘油或二甲基亚砜(DMSO),可使溶液冰点降低,加之在缓慢冻结条件下,细胞内水分透出,减少了冰晶形成,从而避免细胞损伤。 采用"慢冻快融"的方法能较好地保证细胞存活。标准冷冻速度开始为-1 到 -2℃/min,当温度低于-25℃时可加速,到-80℃之后可直接投入液氮内(-196℃)。
我用bioteke的中量全血基因组DNA提取试剂盒(溶液型)提取冻存全血DNA:蛋白质沉淀液处理后上清呈褐色或淡红色,不是无色;在加入异丙醇后是褐色或淡红色絮状沉淀,不是白色絮状DNA沉淀。
我是参照试剂盒说明一步一步来的,请问这是什么原因?
是不是溶血啦,还是蛋白质没有沉淀完全,如何解决这一问题?
感谢啦!
吹打最好还是用弯头的,用起来更为方便
伤,有必要使用含有DMSO冷冻保护剂。 DMSO能够快速穿透细胞膜进入细胞中,降低冰点、延缓冻存过程, 同时提高细胞内离子浓度,
减少细胞内冰晶的形成,从而减少细胞损伤。深低温时二甲基亚砜的细胞毒性受到抑制。复苏时动作要快,尽快洗掉二甲基亚砜,否则会造成对细胞严重的毒性。二
甲基亚砜(DMSO)是目前最好的细胞冻存保护剂,但也是一种以细胞毒性很大的化学试验剂。研究结果表明,培养液中DMSO浓度为10%时,细胞生长抑制
率近100%;1‰浓度时抑制率为35%,即使是0.04‰的浓度,DMSO对细胞的生长也有不利的影响。
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