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抑制素的试剂运用
2021-08-09
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丿闷油瓶61
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1.洗液:在100ml浓缩洗液中加入900ml去离子水稀释。室温密封情况下可保存1个月。2.微孔板:选择实验所需的板条数。剩余不用的部分随同干燥剂密封放回原袋。 1.包被有抗抑制素bB亚单位抗体的微孔板(Anti-InhibinB-CoatedMicrotitrationStrips):96孔,2-8ºC下密封保存。2.标准品A/样本稀释液(InhibinBStandardA/SampleDiluent):2ml×1瓶,胎牛血清,含0pg/mL二聚体抑制素B。使用前2-8ºC下保存。打开后2-8ºC下可保存2周。于-20ºC可长期保存。3.标准品B-G(InhibinBStandardsB-G):1ml×6瓶,胎牛血清,含二聚体抑制素B的浓度为10,30,100,250,500,1000pg/mL。使用前2-8ºC下保存。打开后2-8ºC下可保存2周。于-20ºC可长期保存。4.质控(InhibinBControls):1ml×2瓶,浓度I、II,胎牛血清,含低浓度和高浓度的抑制素A二聚体。使用前2-8ºC下保存。打开后2-8ºC下可保存2周。于-20ºC可长期保存。5.样本稀释液A(InhibinBSampleBufferA):10ml×1瓶,2-8ºC下保存。6.样本稀释液B(InhibinBSampleBufferB):10ml×1瓶,2-8ºC下保存。7.抗体-生物素结合物(InhibinBAntibody-BiotinConjugate)(即用型):10ml×1瓶,含生物素标记的抗抑制素a亚单位抗体。2-8ºC下保存。8.酶结合物(浓缩)(Streptavidin-EnzymeConjugate)(即用型):10ml×1瓶,含链霉和素-辣根过氧化物酶结合物。2-8ºC下保存。9.TMB底物溶液(TMBChromogenSolution):15ml×1瓶,2-8ºC下保存。10.终止液(StoppingSolution):15ml×1瓶,为0.2M的硫酸。2-8ºC下保存。11.浓缩洗液(WashConcentrate):100ml×1瓶,2-8ºC下保存。 操作前所有试剂都应平衡至室温(~25ºC)并充分混匀。标准品、质控及待测样本需同时做双份。1.取出实验所需板条,并记录各孔位置。2.在对应的孔中加入标准品、质控及待测样本各50ul。3.每孔加入25ul样本稀释液A。4.每孔加入25ul样本稀释液B。5.封板,以300-400rpm速度震荡,室温下过夜(14-18小时)。6.洗板3次,在吸水纸上拍干。7.每孔加入50ul抗体-生物素结合物。8.封板,以500-700rpm速度震荡,室温下孵育1.5小时。9.洗板6次,在吸水纸上拍干。10.每孔加入50ul链霉和素-辣根过氧化物酶结合物。11.封板,以500-700rpm速度震荡,室温下孵育20分钟。12.洗板6次,洗完最后一次以后,将洗液在孔内停留15分钟再除去。在吸水纸上拍干。13.在每孔中加入100ulTMB底物溶液。14.以500-700rpm速度震荡,室温下避光孵育15-30分钟。15.每孔加入100ul终止液。16.30分钟内在450nm处读数。注:必须以零标准作空白。如果能做到双波长测定,可在600或620nm处读数,将600(620)nm吸收值从450nm处减去,这样可以减少光学误差。 使用血清样本,静脉穿刺术采集血液。样本于2-8ºC可保存24小时,-20ºC或以下可保存30天。避免反复冻融样本。不应采用溶血或脂血的样本。冰冻的样本在实验前应解冻,并充分混匀。向左转|向右转
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