求助，细胞转染后功能实验的设计问题！
2021-07-22
问题描述：
我刚开始做转染，悬浮细胞，分别做过表达和敲减，看了很多文献，大都没有提及转染后是用转染的这同一批细胞同时做pcr，wb，cck8，凋亡，细胞周期；还是说这次转染只做pcr或wb，再转染一次做cck8或细胞周期。剩下的功能试验均同前，转染一次做一次？我养的是悬浮细胞，转染后做cck8这些功能试验前需要离心换液吗？跪谢解答！
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小猪笑笑917115
用户
展开引用粉爱天晴 我刚开始做转染，悬浮细胞，分别做过表达和敲减，看了很多文献，大都没有提及转染后是用转染的这同一批细胞同时做pcr，wb，cck8，凋亡，细胞周期；还是说这次转染只做pcr或wb，再转染一次做cck8或细胞周期。剩下的功能试验均同前，转染一次做一次？我养的是悬浮细胞，转染后做cck8这些功能试验前需要离心换液吗？跪谢解答！......我认为应该是同时处理的细胞，同时做相应的实验，可信度比较高
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粉爱天晴
用户小猪笑笑917115我认为应该是同时处理的细胞，同时做相应的实验，可信度比较高理论上好像是应该这样，但是转染后细胞的数量达不到做这些功能实验的数量
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shylook
用户粉爱天晴理论上好像是应该这样，但是转染后细胞的数量达不到做这些功能实验的数量为什么不做稳转
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粉爱天晴
用户shylook为什么不做稳转我的质粒是PEX，问了厂家可以做瞬转也可以做稳转，但是不知道怎么做，新手~各种查阅啊
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shylook
用户粉爱天晴我的质粒是PEX，问了厂家可以做瞬转也可以做稳转，但是不知道怎么做，新手~各种查阅啊载体全称？
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粉爱天晴
用户shylook载体全称？pEX-4
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shylook
用户pEX-4（pGCMV/MCS/T2A/EGFP/Neo）？只能瞬转吧
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粉爱天晴
用户shylookpEX-4（pGCMV/MCS/T2A/EGFP/Neo）？只能瞬转吧是的，稳转要g418筛，很慢~大神我想请问一下，如果瞬转的话，是不是转一次做一次cck8，转一次做一次pcr这样子？不断转染然后一个一个做功能试验?不可以转染一次后，就用这批转染后细胞做全部的功能试验吗~
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shylook
用户当然可以不过要wb验证所以最好筛到stable
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粉爱天晴
用户shylook当然可以不过要wb验证所以最好筛到stable问了一下师兄师姐，他们说做稳转需要筛很长时间，我们用的是白血病细胞株，悬浮细胞
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粉爱天晴
用户shylook为什么不做稳转请问，细胞瞬转10h之后可以换液吗？
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shylook
用户4-6h换液
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粉爱天晴
用户shylook4-6h换液好的，谢谢大神！！
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dxy_tzto6ule
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