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威格拉斯生物技术 北京 有限公司 高效真核转染试剂高效真核转染试剂 VigoFect 产品说明 产品说明 本试剂采用一类阳离子非脂性物质为主的配方 可以与DNA形成稳定的复合物 透 过细胞膜进入细胞内 并保护DNA免受核酸酶的降解 该试剂对细胞毒性很小 可 在含血清与抗生素的完全培养液中充分发挥作用 对多数培养细胞种类都有较高的 转染效率 不同种类细胞的转染效率可有明显差异 此类试剂是目前非病毒介导 方法中效率最高的转染试剂 产品内容与储存方法 产品内容与储存方法 名称名称 数量数量 保存条件保存条件 VigoFect 0 4 ml 4 可进行200次转染 6孔板或35 mm平皿 常温运输 4 保存 有效期6个月 所需其它试剂 所需其它试剂 使用者需准备150 mM NaCl 超纯水配制 高压或过滤灭菌 或注射用生理盐水作为 VigoFect及DNA的稀释液 和要转染的DNA溶液 高纯度 浓度0 1 2 g l 操作方法 操作方法 准备培养细胞 准备培养细胞 1 转染前24小时 接种适量细胞 接种数量可参考附表 至转染时细胞密度以 40 60 为宜 80 90 亦可 2 转染前1小时 更换新鲜的完全培养液 体积可参考附表 置37 5 CO2 培 养 配制转染工作液 配制转染工作液 6孔板或35 mm平皿 2 ml培养液 3 取5 8 g DNA 起始用量5 g 加入稀释液中至总体积为100 l 轻轻混匀 室 温放置 4 取VigoFect 1 4 l 起始用量2 l 加入稀释液中至总体积为100 l 轻轻混匀 室温放置5分钟 5 将稀释的VigoFect逐滴加入稀释的DNA溶液中 轻轻混匀 所得的转染工作液在室 温放置15分钟 6 将转染工作液轻轻混匀 逐滴加入2 ml培养液中 轻轻混匀培养液 置37 5 CO2 培养 细胞后续处理 细胞后续处理 7 24 48小时后 观察或收取细胞 8 稳定转染时 于转染后24 48小时消化细胞分至3 5个培养皿中 加适当浓度的相 应抗生素 如G418 筛选 电话 010 58941231 010 58941232 传真 010 58941232 网址 电子邮件 runon 威格拉斯生物技术 北京 有限公司 注意事项 注意事项 1 少量使用Vigofect时 可取精确量的VigoFect用无菌超纯水稀释一定倍数 以便精 确取样量 该稀释液可在4 保存1月左右 2 细胞的生长状态是转染效率的一个主要决定因素 在实验条件许可的情况下 使 用高质量的培养液 优质血清等 可能会明显提高转染效率 3 DNA和VigoFect的混合比例 决定了形成复合物的颗粒大小和性质 复合物颗粒 的大小和性质 对细胞的DNA吸收能力有重要影响 不同细胞达到最佳转染效率 所需复合物的颗粒大小 性质和数量 可能又有微小或很大差异 提高转染效率的方法 提高转染效率的方法 1 使用高质量 高纯度的质粒DNA 2 转染时细胞应处在生长旺盛状态 3 从起始用量开始 调整配制转染液中DNA和VigoFect的用量 保持转染工作液总 体积不变 以确定不同细胞的最佳转染条件 一般固定DNA用量 5 g 与 系列含量的VigoFect混合 选取VigoFect的最佳用量 也可固定VigoFect用量 2 l 与系列含量的DNA混合 选取DNA的最佳用量 4 进一步减少转染时培养液体积 转染后6 16小时再补加足量培养液 5 如有可能 且细胞可以耐受 可将培养容器在加入转染工作液后立即250 g离心5 min 降低细胞毒性的方法 降低细胞毒性的方法 通常本转染试剂对细胞的毒性很低 如个别种类细胞对本转染试剂特别敏感 可通过 以下方法降低细胞的毒性反应 1 确保质粒DNA无杂质污染 2 检查表达蛋白对细胞是否有毒性 3 增加转染时培养液体积 或略减低转染工作液的用量 4 转染后3 6小时去除含转染液的培养液 更换为新鲜的完全培养液 5 转染时细胞密度不能过低 表 建议的起始转染条件 表 建议的起始转染条件 培养容器 转染前一天接 种细胞数 转染时培 养液体积 DNA用量与稀释 后体积 VigoFect用量与 稀释后体积 万 ml g l l l 96孔板 1 1 5 0 1 0 25 5 0 1 5 24孔板 5 10 0 5 1 25 25 0 5 25 6孔板 20 40 2 5 100 2 100 35mm平皿 20 40 2 5 100 2 100 60mm平皿 40 60 4 10 200 4 200 电话 010 58941231 010 58941232 传真 010 58941232 网址 电子邮件 runon 展开阅读全文
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