脂质体介导的真核细胞转染实验一脂质体介导短暂表达
| 实验材料 | 哺乳动物细胞 试剂、试剂盒 | 质粒DNA完全培养基氯化铯DMEM 仪器、耗材 | 培养皿培养箱聚苯乙烯管 实验步骤 | 1. 按5×105细胞/孔的量在六孔板中接种指数期生长的细胞，在37℃5%CO2培养箱中培养过夜，直至细胞80%汇片。（如果用100mm培养皿代替六孔扳，则培养细胞至80%汇片，将所有数量扩大8倍） 2. 在聚苯乙烯管中配制DNA/脂质体复合物如下：稀释质粒DNA至1mlDMEM-SF中，在旋涡混合器上振荡1s然后加入脂质体悬液、再次旋起混匀。在室温下温育5~10min，使DNA与阳离子脂质体结合。 3. 吸去DMEM-SF培养液，用1ml的完全DMEM-SF洗1次，吸去DMEM-SF。对毎个35mm孔中，直接在细胞上加1mlDNA/脂质体复合物。在37℃培养箱中温育3~5h。 4. 往每孔细抱中加入1ml的DMEM-20完全培养液，在37℃培养箱中继续温育24~48h。 5. 吸去完全DMEM/DNA/脂质体复合物，毎孔加入2ml新的DMEM-10完全培养液，继续搵育24~48h。 6. 收集细胞：用细胞刮于刮下细胞，或胰蛋白酶消化或冻融裂解细胞。进行适当的表达分析。 |
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发布于 ： 2019-08-28
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