细胞凋亡概念及其特征
细胞凋亡(Apoptosis):也称细胞程序性死亡(ProgrammedCellDeath,PCD), | 细胞凋亡的典型特征: 1)线粒体膜电位的丧失; 2)细胞膜PS(磷脂酰丝氨酸)的外翻; 3)细胞核凝缩和断裂。 |
凋亡(apoptosis)
程序性死亡,机体为更好地适应生存环境而采取的一种主动死亡过程。
凋亡研究热度分析
细胞凋亡与疾病:
凋亡不足 | 凋亡过度 |
肿瘤 | 心血管疾病 |
自身免疫病 | 血液系统疾病 |
病毒感染 | 重症肝炎 |
退行性神经疾病 | |
如老年痴呆症 | |
帕金森症 |
细胞凋亡热点问题:
►细胞接受胞外信号的刺激启动凋亡
►胞内凋亡特异性蛋白酶(如Caspase)的活化
►线粒体对凋亡的调控
►Bcl-2蛋白家族对凋亡的调控
凋亡分期
早期事件: Ø磷脂酰丝氨酸(PS)外翻 Ø线粒体受损 Ø细胞色素C释放 | 中期事件: ØCaspase3/7/8/9活化 | 晚期事件: ØDNA片段化 |
凋亡检测——AnnexinV
关键技术9项
1,接种对数生长
细胞密度通常不超过1×106/ml,以免引起凋亡
2,收集上清消化全收
因部分凋亡细胞可能悬浮于培养基中,须先收集上清,离心收集沉淀,再消化收集贴壁细胞,合并上清和消化下来的细胞。
3,消化Accutase
避免因消化过度使PS外翻,造成假阳性。
用eBioscience的Accutase酶替代胰酶,在多种细胞系中得到验证,对细胞更温和、长时间消化也没有影响。
(对凋亡不明显的实验强烈推荐)
使用细胞消化液--实际效果比较
4,阳性质控联科Multisciences
没有明显的凋亡,该如何调节补偿以及设门?
联科凋亡试剂盒配备阳性质控液,使补偿调节soeasy
5,方案4管单双混合
染色:1,Blank、2,AnnexinV、3,PI、4,AnnexinV+PI
上机:1,Blank、2,50%Blank+50%AnnexinV、3,50%Blank+50%PI、4,50%Blank+50%AnnexinV+PI、
5,50%Blank+25%AnnexinV+PI+25%AnnexinV
6,电压足够大
大到快要超出边界。
7,细胞数量足够多
多到细胞全部收集。
8,补偿横平竖直
3、4象限横平;2、4象限竖直
9,漂亮图片
黄金分割(三分原则)。
关键技术9项
1,接种:对数生长 2,收集:上清消化全收 3,消化:Accutase 4,阳性质控:联科Multisciences 5,方案:单双混合 6,电压:足够大 7,细胞数量:足够多 8,补偿:横平竖直 9,漂亮图片:黄金分割 |