这是我以前翻译的一外文综述，外文现在找不到了，拿出来大家看看，是否有用
“抗肿瘤特异性抗原预防接种方法的设计和评价”

抗肿瘤特异性抗原预防接种方法的设计和评价

我们通过对临床前期小鼠模型的研究，对癌症患者应用肿瘤特异性接种的效果和安全性做出评价。第一批临床实验显示接种的方法是安全的，然而临床应答特别是由疫苗引起的免疫应答仍然缺乏。实际上很多实验到目前为止完成晚期癌症患者的很少，患者期待着抗肿瘤疫苗的巨大功效。另外在自然和疫苗导致的T细胞免疫方面的研究还有待更大的改进。

缩写
APC抗原递呈细胞
CEA癌胚抗原
CTL细胞毒性T细胞
HPV人乳头状瘤病毒
PBMC外周血单核细胞

引言：特异性抗原接种的概述
在抗肿瘤预防接种的开发应用上，免疫学家和肿瘤学家分成了两派：一派利用整个肿瘤细胞作为疫苗，另一派把特定的抗原作为疫苗。
特别是自体固有肿瘤细胞的存在，肿瘤细胞基础疫苗的优点是大体上包括了所有肿瘤相关抗原，至少在疫苗设计上不需要预先识别疫苗中的肿瘤抗原。然而，既然肿瘤细胞基础疫苗的抗原复合物是非常复杂且特征不明显，这就使得在对癌症的治疗效果和副作用上的解释非常困难。
在不同的鼠肿瘤模型中肿瘤细胞预防接种的保护作用显示出来，包括特定的T细胞应答。迄今为止，仅仅在选择的病例中发现对特定抗原的T细胞免疫与临床应答在同一位置，这也说明T细胞应答包括在临床效应中[1,2,3]。在一小部分患者中可以解释预防接种的抗肿瘤效应，但是在大量的病人中很难从有效的数据推断出这一结论。通过肿瘤细胞基础疫苗的例子，可以想象免疫疫苗设计的合理改进是多么的困难。
包含特定抗原的疫苗在应用上有了很大改进，我们发现疫苗导致的免疫与临床应答有关。我们认为特异性抗原的发展大于肿瘤细胞基础疫苗的发展。
现在评论的焦点是需要包括特定抗原和抗原复合物的疫苗简单化，除此之外，有一个准确的方法对疫苗导致的T细胞应答进行评价也是重要的。

疫苗中靶抗原的结构
当前收集到的肿瘤相关抗原大体上分为两部分。第一部分包括不能由正常体细胞表达的抗原，如肿瘤病毒抗原、变异或重组的细胞基因产生的基因及所谓的睾丸癌族的抗原[4]，这组抗原除肿瘤外仅在睾丸中表达。第二部分包括的是正常组织表达的抗原，在许多病例中，肿瘤起源于这些组织。

不在正常组织表达的抗原
原则上，免疫治疗中的靶抗原在自身耐受中不受约束，对这些靶抗原的应答不可能伤害正常细胞。
对B细胞淋巴瘤患者的预防接种显示，通过常见的治疗，应用肿瘤特异性免疫球蛋白独特型作为一种抗原，在几例病例中的结果支持分子赦免学说，还伴随着特异性独特型T细胞和抗体应答[5,6]。尽管这样的处理需要全部的特异性独特型及修饰过的患者疫苗，但获得的引人注目的结果显示这个艰难的程序终于成功了。
含有睾丸癌抗原疫苗的出现有很大的实用性，它是在一种人类肿瘤中发现的异位表达蛋白。MAGE-3抗原有HLA-A限制性，在临床预防接种实验中有广泛的研究。最近的三篇报道[7,8,9]证实这种疫苗含有的肽能使晚期黑色素瘤退化及引起特异性肽细胞毒性T细胞应答。目前有效的数据还不能说明临床和免疫应答之间的关系，这可能与实验选择的对象有关，选择的都是那些晚期有转移的病人，他们接种有效的可能性很小，特别是那些把单一表位作为目标的[7,8,9,10]。
子宫颈癌是由HPV引起的癌症，以HPV为靶抗原的抗肿瘤疫苗的研究很多且很受重视。迄今为止疫苗研究的焦点在HPV瘤蛋白上作为靶子的E6和E7上。疫苗对这些抗原的免疫作用偶尔在一些病例中得到证明，但还缺少有重大意义的临床应答[11-13]。不过，对这些进展期病人的研究还是有希望的。疫苗对HPV6+生殖器瘤[14]的巨大效果暗示接种的方法对早期患者是有很大益处的。

正常体细胞表达的抗原
第二类肿瘤抗原包括特殊组织抗原，诸如黑色素瘤/黑色素细胞，这些抗原广泛的表达于正常组织，虽然有时水平很低（如P53和HER-2/neu）。
用于免疫治疗的靶抗原的开发利用必须考虑以下两个因素：免疫耐受（中枢和/或外周）的存在和可能发生的对正常组织的自身免疫。这些棘手的问题目前正在集中研究。其中转基因鼠显示了自身抗原的不同表达方式和水平[15-17]。迄今为止这些模型的研究显示：只要所涉及的抗原表达的不是太高、太广，就能获得对这些自身抗原的免疫效果。
目前在对结肠直肠癌的临床接种实验中发现了三种自身抗原：P53、上皮细胞粘附颗粒（EP-CAM）和CEA[4]。其中EP-CAM和CEA可作为组织特异性抗原，其表达受正常上皮的限制。
在CEA转基因鼠和人的接种研究中发现，CEA仅对T细胞发生部分耐受，这种耐受可被特定的接种打破形成没有明显标志的自身免疫病[18,19]。
这种观点被实验者在鼠的一种自然肿瘤相关抗原（TRP2）中得到证实。尽管在鼠的实验中发现了对黑色素瘤/细胞抗原的耐受，但这种耐受可被特定免疫程序打破，这就导致了在依赖T细胞的自身免疫应答中对抗B16鼠黑色素瘤的致命作用得到有效保护[20]。
很多临床研究显示：特异性黑色素瘤/细胞抗原的自身免疫能由特异抗原接种后引起相似免疫的例子在人类已发现[1,21,22,23,24,25]。
在P53诱导的鼠中，宽型P53表位的特异CTL升高，在对正常(P53+/+)组织自身免疫缺乏的情况下，还消灭了几种不同的肿瘤。中枢耐受很可能是胸腺表达P53的结果，可能是特定P53有效的诱导阻碍了在正常组织CTL参加的免疫[27]。不过，分离的高亲和力特定CTL至少有两种HLA限制的P53表位[28,29]，特别是在结肠癌患者中发现的特异P53TH细胞参加的免疫，这些多处表达的抗原，其耐受不是绝对的[30]。

疫苗的设计：从简单到复杂

靶细胞毒性T细胞应答
肿瘤相关CTL表位的识别[31]导致最后形成了一个分子限定的特异性抗原疫苗：最小MHC-Ⅰ类限定的一个单纯人工制造肽CTL表位使不完全佐剂乳化。在一类鼠肿瘤模型的疫苗上获得了预期结果，识别许多CTL表位化合物在人类肿瘤的表达，唤起了在癌症患者身上相似的基础肽疫苗的实验。
首先进行的临床Ⅰ期研究显示：这些疫苗在晚期癌症患者身上并不能引起大的对患者不利的副作用及有效的特异肽T细胞应答[1,7,8,9,10,12,13,21,22,24,25]。显著（部分）抗肿瘤效果仅仅在一部分患者身上得到证实，而真正的治疗效果很少，除了很多病人的T细胞免疫系统的力量减弱外[9,13]，还考虑这些病人通常显示出来的高肿瘤负担。重要的是这些实验清楚的显示了预防接种这种方法在癌症的治疗上有了进展，诸如那些切除原发瘤接受预防接种作为对残留小病灶的辅助治疗的患者。
最近对MART-127-35肽预防接种的研究显示，切除高危黑色素瘤的病人，他的特异肽免疫与延长幸存者自然复发有联系[23]。

CD4+TH细胞应答
两个关于乳腺或卵巢癌患者预防接种的有趣研究[32,33]：由15-18个氨基酸组成的几条多肽构成的特异HER-2/neu疫苗可诱导CD4+TH细胞应答，由重组GM-CSF组成的化合物也被应用。在大多数的接种患者中发现除对HER-2/neu蛋白应答外，还对这些肽产生应答。有趣的是，几个病人对不包括在疫苗内的部分HER-2/neu的应答加强，这就显示HER-2/neu免疫的产生与覆盖的表位有关，这一现象首先在自身免疫病中被描述[32,33]。尽管受时间限制在幸存的病人中进行的肽接种没有得出结论，但特异HER-2/neu接种转基因鼠后，HER-2/neu+肿瘤的发展可明显抑制自发肿瘤的发生[34,35,36]。
Disis等人[32,33]临床研究的焦点在诱导肿瘤特异性TH细胞免疫，尽管与肿瘤有关的免疫并不都是MHC-Ⅱ类限制的。疫苗的设计是以疫苗导致的抗肿瘤应答的诱导效果为基础的，现在甚至瞄准了那些本身缺少MHC-Ⅱ类，在很多时候需要肿瘤特异性CD4+TH细胞合作的固体肿瘤[37]。结果，在详细的测试中出现了一个有趣的现象，那就是不仅有Ⅰ类限制还有Ⅱ类限制的抗肿瘤应答，当前为此做证描述HLA限制的肿瘤相关TH细胞表位的文章增加了。有趣的是肿瘤特异性T细胞的辅助作用更加多了，还发现相互作用的TH细胞和树突状细胞（DCs）构成了一个T细胞免疫诱导的关键位点（keyswitch），通过树突状细胞传递给原始CTL[4]。

以覆盖广泛的HLA分子目录的复合表位为目标
另一个推动疫苗发展的因素是更多的完整的复合物是以复合肿瘤抗原为目标。这就很可能增加疫苗导致的抗肿瘤应答的规模和灵活性。同时可阻止通过选择单一靶抗原丢失而发生的肿瘤逃避[38]。
最后，对癌症患者的预防接种的特殊预防作用和治疗的逻辑和经济方面的可行性很可能得益于off-the-shelf疫苗形式的发展，这种疫苗形式在特定HLA型病人的应用并未受到限制。现在争论的是抗癌疫苗应该更趋于多样化，包括不同HLA分子限制和肿瘤抗原诱导的肿瘤特异性CTL和TH的表位。

抗原组成：特定表位和整个抗原的比较

多表位疫苗
我们希望完成的特异性抗原预防接种包括多个靶表位，这就需要以下两个基础疫苗的设计：首先，多表位疫苗应包括或编码仔细选择收集到的最小的CTL和TH表位；其次，疫苗应包括或编码一个或更多的完整肿瘤抗原。
多表位疫苗一个有效提高对不同抗原诱导表位的免疫的方法，是不需要对可能的危害蛋白质如肿瘤蛋白的基因编码[39]。疫苗允许选择对ubiquitination和隐蔽T细胞表位的免疫反应，特别重要的是肿瘤相关自身抗原的耐受可能因正常组织出现明显表位而出现[32,40]。而且，APCs可能对某一在肿瘤细胞表达的表位递呈减弱，因为APCs的免疫蛋白酶和肿瘤细胞上基本蛋白酶的功能不同[41]。在基础肽疫苗，这样的表位能通过外源依赖抗原吸收和宿主APC加工在‘MHC-ready’形式上实施呈递。
尽管需要宿主APCs的加工，编码插入序列定位的最小T细胞表位的串珠形式的重组疫苗的作用是允许抗原加工的操纵，例如通过插入顺序的选择和遍在蛋白质（ubiquitination）加强及多表位基因产生过程的加工[42,43]。现在明白，复合表位疫苗的设计需要表位方面丰富的知识，但是它提供了一个好的控制T细胞表位及T细胞诱导的指令（repertoire）。另外，疫苗中的表位顺序很容易被修饰以充分利用MHC限制性（MHC-binding）和/或免疫源性[10,44]。

整个抗原疫苗
复合表位的一个缺点是比较危险，例如疫苗上重要表位的缺失，因为这些表位迄今为止还被忽视。足够表位知识的缺乏，使组成疫苗和编码整个肿瘤抗原有一个正确的选择余地。作为对照，多表位疫苗计划离开“自然”而决定其表位由宿主APCs呈递。整个抗原疫苗的优点是：他们的principleharbor不仅有整个CTL表位，而且还有整个TH细胞表位，而且他们的应用不受病人HLA型别的限制。希望整个抗原疫苗能很快的作为“off-the-shelf”形式被应用，这种形式在选择肿瘤相关抗原时不被正常组织表达，比如病毒（viral）和睾丸癌抗原，对suBDominant和隐蔽表位的免疫需要减少。蛋白中有害物质能通过这些抗原的突变解毒而排泄出去，如HPVE6/E7联合蛋白缺少转化的能力[11]。最后，包含肿瘤相关自身抗原的整个抗原疫苗异种形式导致的免疫，在包含同基因抗原相似疫苗时失败[20,45]。
癌症疫苗设计的额外部分是在这篇评论之外的，那就是抗原的呈递模式。这些因素包括分子限定和细胞基础佐剂，炎症因子，调整APC的药物和通过TNF感受体家族表面蛋白的T细胞感应，DNA的选择和病毒基础疫苗带有者（在别处曾有广泛的评论）[4]。

疫苗导致T细胞免疫的正确评价

迄今为止，病人出现疫苗引起的应答和临床应答相联合的还是缺乏的。在这些研究里对接种实验的免疫评价方法有了清楚的规划。在当前的文献和我们自己实验里有效数据的基础上，我们提出疫苗引起抗肿瘤免疫的测试方法，详述如下。

CTL应答的测试
特异性CTL免疫在试管内测试结果，IFN-γELISPOT测试包含了潜伏的主要PBMCs的一个或多个最小肽表位，其结果是灵敏的，可信赖的[23,24,46]。多表位疫苗靶肽的选择在ELISPOT测试中是被支持的，而整个抗原疫苗包含了大量的肽，例如，被利用的所有预测的表位或一套完整的重叠的肽[47]。自体移植细胞（单核白细胞系）由带菌者（viralvectors）感染，编码interest抗原或control抗原作为独特刺激细胞服务。在这里应答比较弱，在试管里单一刺激被考虑在内[48,49]。
监视选择肽的CTL免疫，用HLA-四聚体染色由荧光活性细胞（FACS）组成一个elegantadditionapproach。在急性应答或慢性感染者新鲜PBMC的样品中很快发现了CTL，能识别MART-1/26-35表位。HLA-A0201独特的表位CTL上出现频率很高，原因不知[46]。最近两篇报道也证实，gp-100和特异酪氨酸酶CTL在黑色素瘤患者新鲜PBMCs中发现。然而，在其他大多数的病例中，试管中四聚体细胞清除检查需要瞬间刺激[49,51-53]。在引流淋巴结中测试的淋巴细胞比在外周血中的结果要高[54,55]。
四聚体在实验抗原和自然T细胞中都发现了，而在ELISPOT测试中仅测到了记忆和效应器细胞[46,56,57]。因此，ELISPOT是一个专门辨别比较疫苗导致T细胞和幼稚及无活性T细胞的技术。四聚体的染色与试管中由IFN-R产生引起的CTL的染色相同[10,50]。
四聚物染色（Tetramer-staining）一个新的有趣的应用最近出现了：用特异性肽CTL，在淋巴和非淋巴样器官中进行探测[58]。接下来的研究将要揭示这一技术是否可行，相应的工作在鼠身上已显示可以用特异性抗原T细胞在癌症病人的淋巴结引流和活检中进行探测，这就提供了一个更好的发展方向：肿瘤特异性抗原T细胞和癌症患者的APCs之间的相互作用。

TH细胞应答的测试
对免疫中抗原特异性TH细胞的评价，正如IFN-γ和IL-4（分别测TH1和TH2免疫）ELISPOT方法短期扩散（激增）方法是比较好的[32,33]。在这些实验中，成熟抗原和幼稚T细胞释放的细胞因子可以区别开分别进行检测。依靠这些接种模型，选择短肽或一套重叠的长肽来覆盖整个感兴趣（interest）抗原（尽管昂贵）已经完成了。此外，区别低亲和力特异肽T细胞和那些能识别的自然加工抗原的生理（数量）是必不可少的。通过对APCs重组蛋白反应的测试说明interest抗原和对照（control）抗原可由同一方式产生[32]。MHC-Ⅱ类四聚体最近能被利用[59]，试管内产生的T细胞也通过细胞内对细胞因子染色被分解，这就保证了反应T细胞属于CD4+T细胞系列。

带菌者（vector）应答和体液应答的测试
上述方法的焦点在于试管中测试的对肿瘤interest抗原的T细胞免疫应答。在应用病毒进行接种的病例中，对这些病毒的应答也能被监视，这就表明疫苗是有效的。而且，在人体内对抗原免疫和迟发型过敏应答的测试也显示是大大有益的[1,33]。
最后，我们应该强调的是，抗肿瘤体液应答是重要且相对容易的，特别是在整个抗原疫苗。实际上，在鼠和临床研究中肿瘤抗原特异性免疫球蛋白应答包含了很多抗肿瘤应答[5,45,60,61]。


在所有的病例中，免疫的评价应包括相同的健康人或安慰剂对照组的测试，对每一个测试背景进行评价，保证发现的应答真正的与疾病和/或预防养生之道相联系[46]。

结论

下一代特异性抗原癌症疫苗可能发展适用于小进展阶段疾病病人的疫苗，和对自然和疫苗导致的免疫进行有效和准确的评价，意思就是癌症的免疫治疗将到来。在接下来的临床实验中将会肯定特异性抗原疫苗在病人中产生的强大T细胞免疫的能力，和与疫苗导致的免疫相关的真正治疗效果在结果中的增多。