1.初筛
选择来自21只新斯科舍省鸭收费猎犬（NSDTR）的血清用于蛋白芯片筛选，其中9只为有ANAS的犬，3名为有ANAH的犬和9名健康对照的。将具有不同ANA（抗核抗体）模式的IMRD（免疫介导的自身免疫疾病）患者分为两个亚组：斑点（ANAS）和同源（ANAH）。通过分析确定了7种自身抗原（ILF2，FAM134B，CCDC97，ETFB，PAIP2，CTDP1和NUBP1），其中ILF2是最有希望的候选自身抗原。
图1. 实验设计及初筛结果
（a） 实验设计流程图；（b）ILF2被鉴定为犬免疫介导的风湿性疾病（IMRD）中的潜在自身抗原。
2.验证
在体外表达重组放射性标记的ILF2，并用患者和对照血清进行免疫沉淀。放射性配体结合试验（RLBA）证实了蛋白芯片筛选的结果。在扩展队列中，血清采集分别来自与141个ANAS，54个疾病组（16个IMRD ANAH、21个IMRD ANAneg、17个SRMA）以及75个健康对照组，研究发现，ILF2自身抗体仅在ANAS血清中发现。
图2.大样本验证ILF2
（a）放射性配体结合验证ILF2作为自身抗原；（b）扩展队列验证ILF2作为自身抗原（IMRD ANAS，IMRD患者采用斑点抗核抗体（ANA）模式IMRD；ANAH，IMRD患者采用同源ANA模式IMRD；ANAneg，IMRD患者没有ANA；SRMA，类固醇反应性脑膜炎-动脉炎。）
3.ILF2和ILF3关联性研究
ILF2蛋白主要在细胞核中表达为与ILF327的异二聚体复合物。由于这种关联，我们验证ILF3是否也可能是IMRD患者中自身抗体的靶标，与ILF2自身抗体一样，ILF3自身抗体仅存在于ANAS血清中。
ILF2和ILF3蛋白可与其他蛋白质形成复合物，包括RNA结合基序蛋白，X染色体-RBMX（也称为hnRNPG），而RBMX被认为是狼疮样疾病和ANAS的自身抗原。为了更好地理解RBMX自身抗体与ILF2或ILF3之间的关系，对RBMX自身抗体的总犬群进行了筛选。在分析所有三种抗原的自身抗体的148个ANAS样品中，95个（64.2％）对于至少一种抗原是阳性的，而对于ILF2和ILF3是77（52.0％），没有血清仅对ILF3呈阳性。
图3. 筛选ILF3和RBMX自身抗体的犬群 后续研究还评估了ILF2和ILF3自身抗体在人类疾病中的存在，筛选了患有SLE，Sjögren综合征或系统性硬化症（硬皮病）患者的血清，发现ILF2和ILF3自身抗体的频率较低。研究表明ILF2和ILF3自身抗体有可能用作诊断犬的生物标志物，并且还可能用作人自身免疫疾病的筛查。 参考文献 广州博翀生物科技有限公司是一家专业提供蛋白质芯片，凝集素芯片，药物小分子芯片等产品和定制服务的高科技公司。公司成立于2009年，为中国科学院生物物理研究所成果转化的标杆企业，专注于蛋白芯片技术和产品，立志打造为国际一流的生物芯片整体服务专家。
（a）使用放射配体结合测定法筛选狗中的ILF3和RBMX（b）自身抗体；（c）ILF2，ILF3和RBMX的反应性。
BremerHD, etal.ILF2andILF3areautoantigensincaninesystemicautoimmunedisease[J].ScientificReports,2018,8(1).
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蛋白质组学技术的发展为研究自身免疫性疾病的新途径开辟了道路。包含数千种全长蛋白质的人类蛋白质芯片已成功用于鉴定人类自身免疫疾病中的新型自身抗体靶标。
美国CDI的HuProt™人类全蛋白质组芯片是迄今为止最高通量的蛋白组芯片，包含20,240个蛋白，蛋白质库大，适用于大规模样本筛选而且消耗样本量较少。是用于疾病自身抗体标志物发现的理想工具。该款蛋白质芯片已应用于原发性胆汁性肝硬化、神经精神性红斑狼疮等自身免疫性疾病，以及胃癌等恶性肿瘤的生物标志物发现。
2014年，博翀生物正式成为CDI的代理商。博翀生物拥有成熟的蛋白质芯片技术服务平台和实践经验，目前正在开展肿瘤标志物筛选计划（TEAMS）和自免病诊断自身抗体标志物筛选计划（ADREAM），我们期待您的加入！
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