Target | 10-180 kDa Protein Marker |
Tested Applications | WB, SDS-PAGE |
Storage | Store at -20°C for up to 2 years. |
Buffer | 100 mM Tris-HCl (pH 6.8), 5 mM EDTA, 10 mM DTT, 10% glycerol, 1% SDS. |
Concentration | Approximately 2 µg/5 µl for each band |
Directions for use | Mix well before use. Use 5 µl/well for small gels or 10 µl/well for larger gels. |
Availability | Shipped within 5-10 working days. |
Note | This product is for research use only. |
Abbexa是一家致力于为生命科学研究、药物研发及生物技术公司提供优质抗体、蛋白及检测试剂盒等产品的高科技生物技术公司。基于剑桥大学研发技术优势,Abbexa提供包括一抗、二抗、纯化蛋白、ELISA试剂盒、各种酶类及其它多种试剂与研究工具的大量生命科学研究产品。
目前Abbexa的产品涵盖单克隆抗体、多克隆抗体、纯化蛋白质及生物试剂,此外,为满足研发人员特殊的实验需要,Abbexa还提供抗体/多肽定制服务。严格的质控标准保证了Abbex产品的高性能,如您对产品不满意,Abbexa将直接提供退/换货服务
CLIAKits 化学发光免疫分析(chemiluminescenceimmunoassay,CLIA) RNAInterferenceProducts RNA干扰试剂 RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double-strandedRNA,dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。基因沉默,主要有转录前水平的基因沉默(TGS)和转录后水平的基因沉默(PTGS)两类:TGS是指由于DNA修饰或染色体异染色质化等原因使基因不能正常转录;PTGS是启动了细胞质内靶mRNA序列特异性的降解机制。有时转基因会同时导致TGS和PTGS。 由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达,(长度超过三十的dsRNA会引起干扰素毒性)所以该技术已被广泛用于探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的治疗领域。 1. RNAi抑制转座子活性 两方面的证据提示转座子活性的抑制与siRNA有关 ①发现蠕虫mut-7基因参与RNAi并且与转座子的转座抑制有关; ②在果蝇中,参与RNAi的RNA解螺旋酶Spindle-E的突变将导致该基因引起的基因沉默的缺失,同时提高了反转录转座子活性。 2. RNAi抵御病毒感染 在拟南芥中研究转基因引起基因沉默时发现,sgs2/sde1基因突变的拟南芥对病毒的侵染表现出高度的敏感性。 3. RNAi参与异染色质的形成和维持 Hall等研究表明,着丝粒同源重复序列和RNAi组分一起正负调节着异染色质的形成并共同促使异染色质组装成核;Vople等在敲除裂殖酵母(S.pombe)的RNAi途径基因(如Argonaute、Dicer、RDRP)时发现异染色质转录得到的dsRNA可以在RNAi途径的参与下,加工成siRNA,siRNA募集异染色质蛋白1(HP1),然后靶向性引起相应异染色质区域的转基因沉默。 4. RNAi参与机体的发育调控及生理代谢 RNAi只抑制转录后的基因,所以RNAi在生物体发育学研究中具有优势。Chuang等用RNAi技术进一步证实了AG、CLV3、AP1、PAN等已知功能基因在拟南芥花发育过程中的功能。在RNAi过程中形成的RISC复合物可根据不同情况分别利用siRNA或stRNA行使不同的功能,但最终均导致特定基因沉默。 IsotypeControl 同型对照 同型对照(IsotypeControl),使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白,用于消除由于抗体非特异性结合到细胞表面而产生的背景染色。 同型对照 同型对照的主要目的是确定一抗的结合是特异性的,而不是非特异性的Fc受体或与其他蛋白的相互作用。还可以用来竞争性的结合抗体,与功能阻断抗体发挥同样的功能。 同型对照要与一抗的来源,Ig分型和标记完全一致。 如果一抗是多抗,可以用annormalserum(与一抗相同的正常血清)(mustbethesamespeciesasprimaryantibody)。Thiscontroliseasytoachieveandcanbeusedroutinelyinimmunohistochemicalstaining.这个可以咨询试剂商。同型对照为免疫荧光标记中的阴性对照。由于荧光标记单抗的组来源不同,应选用相同来源的未标记单抗作为同型对照来调整背景染色。举个例子:比如检测一抗为单抗的mouseantiratCD11b,cloneOX-42purifiedIgG,那么它的isotype是mouseIgG2a,所以可以用purified(纯化的)mouseIgG2a来做OX-42的同型对照(IsotypeControl)。一般的的生物技术公司和国内的代理都有出售。 同型对照:是指与MoAb相同的、未免疫小鼠的免疫球蛋白亚类,若使用直接免疫荧光染色法,同型对照也应标记荧光色素,如IgG1FITC、IgG2a、PE等。主要考虑了细胞的自发荧光、FC受体介导的抗体结合和非特异性抗体结合等影响因素。此外,同型对照与MoAb所标记的荧光色素、浓度、F:P比值(标记的荧光色素与免疫球蛋白分子的比值)应该相同为最佳,这对准确设定阴性与阳性细胞的界标有重要意义,切忌使用与MoAb不相匹配的同型对照,最好为同一实验室、采用相同工艺或方法制备(如同一品牌)的产品。
ebiomall.com
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
抗原注射进入动物体内后,因为不是一个单独的分子,会随血液循环输送到各处,也就会接触不同的免疫细胞。有些还会被抗原提呈细胞再加工。所以最后的结果是很多个免疫细胞都会接触到。一个抗原分子也有很多抗原表位。每个表位理论上都有能力激活一个B细胞转化为浆细胞。所以体内最后针对该抗原的必定是多克隆
由于动物个体差异的存在,同一抗原免疫同一种系不同个体的动物,产生的抗体的效价有很大的差异.与动物的年龄和营养状况密切相关.免疫用的动物最好选择适龄的健康雄性动物,雌性动物特别是妊娠动物用于制备免疫抗体则非常不合适,有时甚至不产生抗体.
先饲养观察7天其实就是等于隔离检疫,观察一下兔子的身体状况和是否带有其他传染病,淘汰体质多病的个体,防止在免疫过程中死亡或免疫应答不灵敏而不产生抗体.
联系电话:010-84492262杨先生
第四节 抗原的分类
一、天然抗原
根据抗原性物质与机体的亲缘关系可分为“自己”(self)与“非已”(non-self)抗原。即与机体种系发生关系愈远,其遗传性差异越大,其免疫原性也愈强。
(一)“自己”抗原
正常自身组织成分及体液组分处于免疫耐受状态,不能激发免疫应答,但如打破自身耐受,则可引起自身免疫应答;另一些自身组织成分虽具有免疫原性,但在正常情况下,由于组织屏障,不能进入血流,因此不能与免疫细胞接触,也不能激发免疫应答,称此种抗原为隐蔽性身抗原,如脑组织、眼晶状体蛋白及精子等。一旦因外伤或手术等原因,可使此种抗原进入血流时,则可引起自身免疫应答。受病原微生物的感染或应用某些化学药物,可与自身组织蛋白结合,改变其分子结构,形成修饰的自身抗原,也能引起免疫应答。
(二)非已抗原
来自异种动物的抗原物质称为异种抗原。如来自外部侵入人体的各种病原微生物及其产物的外毒素,注射的异种动物免疫血清,以及吸入和食进的异种蛋白,例如花粉和食物均属异种抗原。由于与人种属关系远为强免疫原。此外癌细胞可在人体内产生特异性癌抗原,但对其免疫原性迄今尚未能证实。
在同种动物不同个体间也存在各种组织成分抗原性的差异,称此种抗原为同种异型抗原。这种抗原受遗传支配,它可在遗传性不同的另一些个体内引起免疫应答,称之为异型免疫应答。如人血型抗原不同输血时可引起输血反应,组织相容性抗原或移植抗原型不同可引起移植排斥反应。此外,免疫球蛋白分子上存在的Gm、Am、Km标记均属异型抗原,可用以鉴别IgG、IgA及K轻链的异型。
在不同种属动物组织间也可发现有共同抗原,称这种抗原为异嗜性抗原。Forssman首先发现这种抗原,故亦称之为Forssman抗原。即这种抗原无种属特异性,它可共同存于人、不同种动物与微生物之间,因此它与疾病的发病学和诊断有一定意义。
目前已发现多种异嗜性抗原,如大肠杆轿O86含有人的B血型物质,肺炎球菌14型含有人A血型物质,它们与人血型抗体的产生有关。有些病原微生物与人体某些组织具有共同抗原成分,是引起免疫性疾病的原因之一。如溶血性链球菌一些抗原可与肾小球基底及心肌组织有有共同抗原成分,它们可能与急性肾小球肾炎和风湿病的发病有关。又如大肠杆菌O14型脂多糖与人结肠粘膜有共同抗原,可能与溃疡性结肠炎的发病有关。
某些疾病的诊断也可借助于对异嗜性抗原的检测。例如引起原发性非典型肺炎的病原支原体与MG株链球菌有共同抗原,可藉其血清中抗体对此种链球菌的凝集反应进行诊断,引起斑疹伤寒的立克次体与变形杆菌一些菌株间有共同抗原,可藉其血清中抗休对变型杆菌的的凝集反应进行诊断,称之为Weil-Felix反应。此外传染性单核细胞增多症患者血清中,可出现凝集羊红细胞的异嗜性抗体,可用羊红细胞凝集反应进行诊断。
二、人工抗原
用化学合成法或基因重组法制备含有已知化学结构决定簇的抗原,称之为人工抗原。它可包括人工结合抗原、人工合成抗原和基因重组抗原。无论对免疫学理论研究和分子疫苗的制备都具有重要意义。
(一)人工结合抗原
将无免疫原性的简单化学基团与蛋白质载体偶联,或将无免疫原性的有机分子如二硝基苯(DNP)或三硝基苯(TNP)与蛋白质载体结合,形成载体-半抗原结合物,均属人工结合抗原。应用此种抗原证明了抗原与抗体特异结合的化学基础,以及在抗体生成过程中T与B细胞的协同作用。
(二)人工合成抗原
用化学方法将活化氨基酸聚合,使之成为合成多肽,只由一种氨基酸形成的聚合体称为同聚多肽,如由左旋赖氨酸形成的共同聚多肽(PLL)。由二种或二种以上氨基酸形成的聚合多肽称为共聚多肽,如由酪氨酸、谷氨酸与多聚丙氨酸和赖氨酸组成的聚合成多肽(T、G)-AL。应用这种人工合成多肽可研究氨基酸种类、序列与蛋白质抗原性及免疫原性的关系,也可研究机体遗传性与免疫性的关系。
对天然蛋白质抗原性的研究证明,任何一个氨基酸片段,只要具有合适的构型,都有抗原性,甚至一小段合成的小肽与合适的载体相联接,也能诱导产生抗体,并能与其天然分子构型相结合,这就提示,可根据天然蛋白质抗原的免疫原性片段进行氨基酸序列分析,或由其编码DNA推导的氨基酸序列,进行构建人工合成多肽疫苗。
(三)基因工程抗原
近年来由于分子生物学技术的进步,已有可能将编码免疫原性氨基酸序列的基因克隆化并与适当载体(如细菌粒或病毒)DNA分子相结合,然后引入受体细胞中(如原核细胞的大肠杆菌或真核细胞酵母菌及哺乳类动物细胞)使之表达,即能获得免疫原性之融合蛋白,经纯化后可做为疫苗,此即基因工程疫苗。
应用分子生物学技术制备基因重组疫苗的另一进展,是将目的抗原决定簇的DNA序列插入另一种比较安全的活病素基因组中(如牛痘苗),制备所谓重组感染载体多价疫苗。
随着70年代分子病毒学的发展,特别是对病毒基因的结构、功能与复制方面知识的积累,为迅速研制病毒亚单位疫苗、合成多肽苗以及基因工程疫苗奠定了基础。
一些重要病毒如乙型肝炎病毒、脊髓灰质炎病毒、疱疹病毒以及流感病毒等的蛋白质多肽,都已利用基因工程进行了成功的表达,有的已进入临床试验阶段。我国也报导了正在进行研制基因工程乙型肝炎病毒疫苗和在牛痘苗表达系统中研制乙肝病毒的重组感染载体的多价疫苗。
三、胸腺依赖抗原与胸腺非依赖抗原
实验证明,由抗原激发的免疫应答是多细胞相互作用的结果,即由抗原呈递细胞、T细胞和B细胞共同参与予完成的。大多数抗原激发的体液免疫应答,必须有TH细胞参予才能完成,称这种抗原为胸腺依赖抗原(thymus-dependent antigen,TD Ag)。但也有少数抗原物质,不须TH细胞参予,可单独刺激B细胞产生抗体,称这种抗原为胸腺非依赖抗原(thymus independent antigen,TIAg)。这二种抗原的区别主要在于其抗原决定簇的结构不同所致。TD抗原在其分子结构上,既具有载体功能的决定簇,也具有抗原性决定簇。且在其分子表面出现多种不同抗原决定簇,但缺乏重复出现的同一决定簇,TD抗原主要是大分子蛋白质。而TI抗原多数为大分子多聚体,带有重复出现的同一抗原决定簇,且降解缓慢,故不须TH参加即能直接刺激B细胞,TI抗原主要是多糖类物质(图10-5、表10-5、6)。
图10-5 TD与T1抗原种类
表10-5 TD与TI抗原种类
TD TI
人丙种球蛋白
牛血清清蛋白
卵白蛋白
类毒素
羊红细胞
组织相容性抗原等
肺炎球菌荚膜多糖
脂多糖
聚合鞭毛
DNP-聚蔗糖
聚乙烯基吡络烷酮(PVP)
表10-6 TD抗原与TI抗原的特性
特性 TD抗原 TI抗原
TⅠ-1 TⅠ-2
化学特性 蛋白质 脂多糖 多糖
抗体应答 + +
无胸腺鼠 - + -/少
无T细胞培养物 -
抗体应答的特点 -
类别转换 + - -
亲和性成熟 + - -
记忆B细胞 + - -
多克隆B细胞活化剂作用 - + -
诱导DTH能力 + - -
四、超抗原
(一)超抗原的概念
超抗原(supper antigen,Sag)是一类由细菌外毒素和逆转录病毒蛋白构成的抗原性物质。它们能与多数T细胞结合并为T细胞活化提供信号。而上述的普通抗原只能与少数对应T细胞结合并使之活化。因此称这种能与多数T细胞结合的抗原为超抗原。
(二)超抗原与T细胞结合的特征
超抗原主要与CD4+T细胞结合,而和普通抗原肽与T细胞的结合有很大差异。超抗原既能与APC细胞上MHCⅡ类分子结合,也能与TCR Vβ链结合是其作用特点。
超抗原无需经APC加工可直接与MHCⅡ类分子非多态区外侧结合,而不是与肽结合沟结合,故无MHc 限制性。
在T细胞方面超抗原只与TCR Vβ片段结合,而与D和J区无关,也与TCRα链无关。任一已知超抗原能与其特殊殊的Vβ片段结合,所以一种超抗原可活化多数T细胞,约占T细胞库的1/20~1/5,这远远超过普通抗原活化T细胞的数量(表10-7)。
表10-7 超抗原的作用特性
普通抗原 超抗原
T细胞一次应答 - +
T细胞反应频率 1/106~1/104 1/20~1/5
MHCⅡ类分子 肽结合沟 非多态区(α-螺旋)
结合部位 外侧
MHC限制性 + -
APC存在 +
(三)超抗原的种类
1.内源性超抗原(病毒性) 70年代初Festenstein发现在MHC相同,而MHC以外基因区不同的纯系鼠间进行淋巴细胞混合培养,可引起很强的T细胞增殖反应,将刺激这种增殖反应的抗原称为次要淋巴细胞刺激抗原(minor lymph'ocyte stimulating antigen,Mlsag)。
近年来证明这种内源性MLs抗原是小鼠乳腺肿瘤病毒(mouse mamary umor virus,MMTV)产生的蛋白。MMTV是一种逆转录病毒,以前病毒(provirus)形式整合于小鼠细胞DNA中。这种小鼠可终生制造这种病毒蛋白,因之可视为一种自身超抗原。这种小鼠内源性MLs抗原的化学性质现已证明是一种糖蛋白。
由于MLs抗原的来源已经清楚,故目前称这种小鼠的内源性超抗原为病毒性超抗原。人类是否也有这种病毒性超抗原,目前尚不能肯定,但有人提出人类免疫缺损病毒(HIV)也是逆转录病毒,有可能是人类的病毒性超抗原。
2.外源性超抗原(细菌性)外源性超抗原是一类细菌性外毒素组成,主要由革兰氏阳性细菌产生。如金黄色葡萄球菌产生的肠毒素(staphylococcus enterotoxin,SE)以及链球菌产生的致热外毒素等。
(四)超抗原的生物学意义
1.超抗原与T细胞的耐受诱导 实验证明在胸腺内分化发育中的T细胞如与超抗原结合,可诱发程序性细胞死亡,导致克隆排除。用抗Vβ单克隆抗体在周围血中检测不出带有特殊Vβ受体的T细胞,为T细胞耐受诱导机制的研究提供了有力的实验模式。
2.超抗原与疾病葡萄球菌感染所产生的外毒素主要是可溶性蛋白分子,近年来的研究证明葡萄球菌外毒素对靶细胞并无直接毒性作用,而是通过活化多数T细胞所释放的大量细胞因子产生的生物学效应引起的毒性休克综合征等临床征状。
一些疾病,例如原因不明的川畸病,风湿性关节等疾病,发现与某些Vβ阳性T细胞的增殖相关。周围组织中存在的自身反应性T细胞克隆可为外源性超抗原激活而引发自身免疫病。也有学者认为HIV引发的人艾滋病,其发病学与其超抗原相关。
暂无品牌问答