制备肌动蛋白实验一从肌肉制备丙酮粉用于纯化肌动蛋白
| 实验材料 | 肌球蛋白 试剂、试剂盒 | 肌球蛋白抽提溶液 仪器、耗材 | 离心机 实验步骤 | 1.抽提肌球蛋白时得到的沉淀物用3倍于沉淀物体积的肌球蛋白抽提溶液抽提10分钟。 肌球蛋白抽提溶液： 0.5mol/LKCl 0.1mol/LK2HPO4 2.抽提物离心（GSA转头，13000r/min，17310g）15分钟，去掉上清。 3.在肌肉残渣中加1L冷的dH2O，搅拌，然后用1mol/LNa2CO3调pH到8.2~8.5。 把混和物分到6个250ml的瓶中，离心（GSA转头，13000r/min，17310g）15分钟离下含肌动蛋白的不溶物。 4.去掉上清。然后如步骤3所述再次离心。倒掉上清并用合适的记号笔画出沉淀物的轮廊（这可以在以后的步骤中确定什么时候沉淀物开始涨大）。加足量冰冷的dH2O装满离心瓶以重悬沉淀物。大概重复4次直到沉淀物开始涨大。 5.沉淀物一开始涨大，不管用水洗的次数是多少，都接着进行下个步骤。 6.在250mlGSA离心桶中用冰冷的丙酮重悬肌肉残渣，剧烈搅拌大约20分钟。 7.离心（CSA转头，13000r/min，17310g）沉淀15分钟并去掉上清。此外，沉淀可以在Bounce漏斗上过滤。 8.重复步骤6和7。 9.把沉淀的蛋白铺在滤纸上（例如Whatman3MM)并让它在室温过夜干燥。 10.第二天，如步骤6所述的那样，把干了的丙酮粉重悬在氯仿里并离心以去掉多余的脂肪。过滤并干燥沉淀。 |
|---|
免责声明 本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容。
版权声明 未经蚂蚁淘授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的，应该授权范围内使用，并注明“来源：蚂蚁淘”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
发布于 ： 2021-09-15
阅读（301）
▍
相关分类
▍
相关文章
从果蝇胚胎中纯化核心组蛋白实验 经验交流列表
Alexa Fluor 647标记链霉亲和素| Alexa Fluor 647conjugated...
试剂 突破性的转染技术
Crystallization Trials 实验方法
IFNalphasignalingpathway资讯
cDNA 法推断蛋白质的一级结构实验
重组杆状病毒的纯化实验 实验方法
碳酸二乙酯市场调研报告2005[2].04.30_图文_
染料配基层析法纯化蛋白质实验 实验方法
SEIWA KASEI CO., LTD.公司提供的Promois WKGBF 个人护理用品...
Cell counting KIT8 (CCK8)日本原装_细胞增殖与毒性_细胞检测...
CN103343274A 高导热金刚石颗粒混杂增强石墨铝复合材料 ...
▍
相关问答
