Pre-made lentivial particles express human codon optimized wild-type Cas9 endonuclease under an enhanced EF1a promoter, with our proprietary NLS (Nuclear Localization Signal) at its N-terminal, for the best nuclear penetration. It also contains a RFP-Puromycin fusion dual marker (under RSV promoter) for selection of the transduced cells via RFP fluorescent signal or via Puromycin antibiotic. The fluorescent signal provides a real-time monitoring of the lentivirus’ transduction efficiency in your cell types.
The particles was concentrated and provided in PBS solution which used for serum sensitive culture, hard to transduced cells or for in vivo application.
See Product Manual here (.pdf).
Application: used for CRISPR gene editing ( Note: used with a separate “gene specific gRNA lentivirus” or ” gene specific gRNA vector” for CRISPR editing )
Amount: 5 x 107 IFU/ml x 200ul in PBS.
Shipping and storage: overnight shipment in dry-ice package. Stored at -80oC.
Cat#: LVP709-PBS
ebiomall.com
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http://tong.dxy.cn/info/infoSupplyView.htm?id=50c35b041b977f34011b97c6bb94325e
发展起各种双杂交系统Fields等建立系统基础些新系统主要报道基、诱饵表达载体及猎物表达载体等做些改进其重要改进引入额外报道基广泛采用HIS3基经改造带HIS3报道基酵母细胞HIS3启表达才能缺乏组氨酸选择性培养基HIS3报道基转录表达由诱饵猎物相互作用所启数双杂交系统往往同使用两甚至三报道基其 LacZ些改造基启区相同转录激结合位点相同转录激(述Gal4蛋白)激通种双重或重选择既提高检测灵敏度减少假阳性现象其针诱饵或猎物表达载体等所作改进详述
双杂交鉴定程要经两转化工作量相特别寻找新作用蛋白质候尤其且酵母细胞转化效率比细菌要低约4数量级转化步骤双杂交技术瓶颈Bendixen等通酵母接合型引用避免两转化操作同提高双杂交效率酵母性殖程涉及两种配合类型:a接合型α接合型两种单倍体间接合(mating)能形二倍体a接合型细胞间或α接合型细胞间能接合形二倍体根据酵母性殖特点文库质粒转化α接合型酵母细胞诱饵表达载体转化a接合型细胞别铺筛选平板使细胞菌苔(lawn)再两种菌苔复印同三重筛选平板原则诱饵靶蛋白发相互作用二倍体细胞才能平板单倍体细胞或虽二倍体细胞BD融合蛋白AD融合蛋白相互作用都淘汰克隆进步通β-半乳糖苷酶力进行鉴定项改进仅简化实验操作且提高双杂交筛选效率展开
用酵母双杂交或是细菌双杂交?
THEGFPTWO--HHYBRIDYBRIDSYSTEM.pdf(126.79k)
http://www.biotech.org.cn/news/news/file/20060417084144.pdf
最近本人在做一个丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的酵母双杂交,想吊出它的互作基因,前段时间用Invitrogen的PROQUESTTWO-HYBRIDSYSTEM筛过一次库,没有得到任何阳性克隆,我估计是连入载体的基因太长有3KB多,1000多个氨基酸,可能就算表达出来了也不能行使正常功能。随后取了蛋白的激酶区1.8KB,想重新筛一次库(还未开始重筛)。后来老板的建议是要我试试酵母细胞质双杂交系统,因为在生物体内,我所研究的蛋白是在细胞质中表达的,可能在酵母细胞核中也不能正常工作(猜测)。
这两天我查了查,发现细胞质的双杂交完全不同,要是做的话还有重新购买另外的试剂盒,重新构建文库。
还有一点就是,前人发表的文章,同样是做我这种蛋白激酶的,都是用传统的酵母双杂交系统筛选到互作蛋白的,如果情况是这样的话我是否还有必要尝试细胞质的双杂交呢?
还是等我做了激酶区的筛库之后再说?
请各位帮忙看看,谢谢。
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