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指外源DNA插入运载体,转入细菌等微物胞扩增几百万倍程.

真核表达载体克隆基因的时候把内含子也克隆进去了，在转到细胞里面表达时，这段内含子会被正确剪切掉吗？

许多国外公司都可以根据用户要求提供高质量的化学合成siRNA。主要的缺点包括价格高，定制周期长，特别是有特殊需求的。由于价格比其他方法高，为一个基因合成3—4对siRNAs 的成本就更高了，比较常见的做法是用其他方法筛选出最有效的序列再进行化学合成。
最适用于：已经找到最有效的siRNA的情况下，需要大量siRNA进行研究。
不适用于：筛选siRNA等长时间的研究，主要原因是价格因素。 以DNA Oligo为模版，通过体外转录合成siRNAs，成本相对化学合成法而言比较低，而且能够比化学合成法更快的得到siRNAs。不足之处是实验的规模受到限制，虽然一次体外转录合成能提供足够做数百次转染的siRNAs，但是反应规模和量始终有一定的限制。而且和化学合成相比，还是需要占用研究人员相当的时间。值得一提的是体外转录得到的siRNAs毒性小，稳定性好，效率高，只需要化学合成的siRNA量的1/10就可以达到化学合成siRNA所能达到的效果，从而使转染效率更高。
最适用于：筛选siRNAs，特别是需要制备多种siRNAs，化学合成的价格成为障碍时。
不适用于：实验需要大量的，一个特定的siRNA。长期研究。
用RNase Ⅲ 消化长片断双链RNA制备siRNA
其他制备siRNA的方法的缺陷是需要设计和检验多个siRNA序列以便找到一个有效的siRNA。而用这种方法——制备一份混合有各种siRNAs “混合鸡尾酒” 就可以避免这个缺陷。选择通常是200—1000碱基的靶mRNA模版，用体外转录的方法制备长片断双链dsRNA ，然后用RNase Ⅲ (or Dicer) 在体外消化，得到一种siRNAs“混合鸡尾酒”。在除掉没有被消化的dsRNA后，这个siRNA混合物就可以直接转染细胞，方法和单一的siRNA转染一样。由于siRNA混合物中有许多不同的siRNAs，通常能够保证目的基因被有效地抑制。
dsRNA消化法的主要优点在于可以跳过检测和筛选有效siRNA序列的步骤，为研究人员节省时间和金钱（注意：通常用RNAse Ⅲ通常比用Dicer要便宜）。不过这种方法的缺点也很明显，就是有可能引发非特异的基因沉默，特别是同源或者是密切相关的基因。多数的研究显示这种情况通常不会造成影响。
最适用于：快速而经济地研究某个基因功能缺失的表型
不适用于：长时间的研究项目，或者是需要一个特定的siRNA进行研究，特别是基因治疗 多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶Ⅲ启动子（pol Ⅲ）中的一种，操纵一段小的发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA）在哺乳动物细胞中的表达。这三类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子。之所以采用RNA pol Ⅲ启动子是由于它可以在哺乳动物细胞中表达更多的小分子RNA，而且它是通过添加一串（3到6个）U来终止转录的。要使用这类载体，需要订购2段编码短发夹RNA序列的DNA单链，退火，克隆到相应载体的pol Ⅲ 启动子下游。由于涉及到克隆，这个过程需要几周甚至数月的时间，同时也需要经过测序以保证克隆的序列是正确的。
siRNA表达载体的优点在于可以进行较长期研究——带有抗生素标记的载体可以在细胞中持续抑制靶基因的表达，持续数星期甚至更久。
病毒载体也可用于siRNA表达，其优势在于可以直接高效率感染细胞进行基因沉默的研究，避免由于质粒转染效率低而带来的种种不便，而且转染效果更加稳定。
最适用于：已知一个有效的siRNA序列，需要维持较长时间的基因沉默。
不适用于：筛选siRNA序列（其实主要是指需要多个克隆和测序等较为费时、繁琐的工作）。 siRNA表达框架（siRNA expression cassettes，SECs）是一种由PCR得到的siRNA表达模版，包括一个RNA pol Ⅲ启动子，一段发夹结构siRNA，一个RNA pol Ⅲ终止位点，能够直接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。和siRNA表达载体不同的是，SECs不需要载体克隆、测序等颇为费时的步骤，可以直接由PCR得到，不用一天的时间。因此，SECs成为筛选siRNA的最有效工具，甚至可以用来筛选在特定的研究体系中启动子和siRNA的最适搭配。如果在PCR两端添加酶切位点，那么通过SECs筛选出的最有效的siRNA后，可以直接克隆到载体中构建siRNA表达载体。构建好的载体可以用于稳定表达siRNA和长效抑制的研究。
这个方法的主要缺点是①PCR产物很难转染到细胞中（晶赛公司的Protocol可以解决这一问题）②不能进行序列测定，PCR和DNA合成时可能差生的误读不能被发现导致结果不理想。
最适用于：筛选siRNA序列，在克隆到载体前筛选最佳启动子
不适用于：长期抑制研究。（如果克隆到载体后就可以了）向左转|向右转

工复制基

primer克隆基改克隆度
百度搜索NCBI gene想查找基名称输入搜索接现表格选择要查找基（主要选择物种）接页面找基各种亚型应mRNA序列编号点进串信息找CDS点页面mRNA序列显示CDS序列
物芯片高密度固定固相支持介质物信息微列阵列阵每序列及位置都已知并按预先设定顺序点阵基芯片物芯片种其固定核算类物质主要用于DNA、RNA析DNA芯片微点阵两种
离目基指基组发现或找某目（标）基目前通①比较同物种间或同物种同体间；或同体同发育期或同环境条件基差异表达（基表达平行析）实现采用基芯片技术进行基差异表达研究通杂交直接检测细胞mRNA种类及丰度与传统差异显示相比具品用量自化程度高检测目标DNA密度及并行种类等优点②利用同源探针cDNA或EST微列阵筛选离目基目前DNA 芯片、cDNA芯片两种其基本步骤包括：基芯片制备、靶品制备、杂交与检测、目基离并获全

高等物基组克隆完整基 真核物与原核物启同且真核物基通间隔基即外显内含相间排列真核物完整基直接转入肠杆菌没用相应启能启mRNA转录且内含能确剪切

选择目基,并设计相应引物；
用引物PCR扩增目基片段；
选择合适（抗性标记、酶切位点等）克隆载体（保真扩增）,并PCR片段连接入克隆载体；（般用Taq酶PCR产物末尾自带A,Solution 1作用与两端各带T线性T载体直接相连）
连接产物转化入受态肠杆菌,使含抗素培养基扩增；
肠杆菌提取质粒（即前面连接产物）,酶切鉴定测序鉴定均误目基片段切并与新表达载体连接,再转化入肠杆菌扩增,再提质粒,即想要目基片段克隆.

基因组DNA文库含有一种生物的全部基因，从基因组文库中获得的基因是完整的
cDNA文库含有一种生物的部分基因，cDNA本质就是外显子
基因组文库大，其中基因含有启动子和内含子
cDNA文库小，没有内含子和启动子

基检测：
DNA杂交技术
DNA-RNA杂交技术
抗体抗原杂交技术

请教各位大虾，最近我想克隆一个大约2.5kb的CDNA，但是由于实验室没有在酵母菌中做过类似试验，所以不知道该怎么入手，一些特别要注意的问题也不太清楚。还有就是不知道那里有专门提供酵母菌的cDNA克隆的公司。如果有这样的公司就可以直接购买了，可以省好多事。希望大家多多帮忙。谢谢！

我克隆了一个菊花中的NCED基因，与ABA合成有关，但是我是根据日本一篇的文章中已克隆出的此基因（也是在菊花中）设计的引物，最终二者比对，还是有区别的，请问我是否可以写进文章中，没有通过5-RACE和3-RACE克隆，如果可以写，应该怎么写呢，请指教下。

大家好，小人是一只小小菜鸟，做实验遇到了很大的问题，希望大家伸出友爱之手，帮帮痛苦中的我

我要克隆一个基因，这个基因有3个外显子，然后和质粒相连，重组载体，转到真核细胞中做表达，我用基因组DNA做模板，请问这么做可以吗，有人做过类似的实验吗？

请大家帮帮忙，本人毕业在即，谢谢大家