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Yeast Transformation
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YeastTransformation

  • inoculate5-10mlculturewithsinglecolonyandgrowON
  • measureOD600nmanddilutetoOD600nm=0.3in50ml
  • growfor2-4hrs
  • spin,washcellswith25mlH2O
  • spin,resUSPendin2ml1xLiAc/0.5xTE
  • incubateatRTfor10min
  • combineintube:100µlcells,10µlsalmonspermDNA(10mg/ml),upto15µlDNAtobetransformed
  • add700µl1xLiAc/1xTE/40%PEGmix
  • incubatefor30minat30°C(shakingornotshaking)
  • add85µlDMSO
  • heatshockat42°Cfor7min
  • spin,resuspendcellsin1ml1xTE
  • spin,resuspendcellsin0.5ml1xTE
  • plate100-200µl/plateandincubateat30°C


Buffers:10xTE:100mMTrispH7.5;10mMEDTA.10xLiAc:1MLiAcinH2O;sterilefilter.50%PEG3350:50%PEG3350inH2O;sterilefilter.

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