waxsectioning & staining
来自 : 蚂蚁淘
- FixsamplesinMEMFAandthenintoDent"sFix(20%DMSO/80%Methanol)
- Ifspecimensneedtobebleached,bleachinCurisBleachfor1/2hourunderwhitelight.Storespecimensat-20°Cin100%methanol
- placeembryosinto100%ethanol(dehydratedwithmolecularsieve(type3A-BioRad)
- infiltratespecimenswithparafin--placeembryosintoglasspetridishcontainingmoltenparaplast(58°-59°C).Repeatwithfreshmoltenwax.
- fillabasemoldwith5mmparafin--moveembryosintomoldwithPipette
- 2Xwasheswithxylene,15minuteseach
- Add50%EtOHand50%Hemo-De,20minutesforlargespecimens
- Replacewith100%wax,2hoursat58°C
- Replacewith100%wax,overnightat58°C*Alltimesareapproximate.Largesamplesrequirelongertime.
- section
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- Heatsteelembeddingdishoverflamebrieflybeforeaddingwax(thispreventsbubblesfromformingandallowsevencoolingofthewax)
- Placeenoughwaxtofillembeddingdish
- Addspecimentodishandorientintodesiredposition
- Placeembeddingringontheembeddingdish(makesurethatthereisenoughwaxinthedishsothattheembeddingringbecomesslightlyimmersedinthewax-thisholdstheringinplace)
- Addhotwaxtothedishuntilitnearlyreachesthetopoftheembeddingring
- Carefullyreorientthespecimenifithasmoved
- Cooloncoolsurface,overnight
- Removedishandsection
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