Product Name | Cys(Npys) - TAT (47 - 57)C(Npys)YGRKKRRQRRR - NH2 |
Size | 1 mg |
Catalog # | AS-61214 |
US$ | $249 |
This peptide corresponds to the protein transduction domain of the TAT protein and is synthesized with an activated cysteine residue C(Npys), wherein Npys is 3-Nitro-2-pyridinesulfenyl group and is used for activating S of cysteine and for rapid reaction when a thiol group is introduced. This kind of modification has been used to render this peptide as a cell penetrating and carrier peptide applicable in conjugation studies. | |
Detailed Information | Material Safety Data Sheets (MSDS) |
Storage | -20°C |
References | 1, Bright R. et al. Neurosci lett. 441, 120-124 (2008) 2, Moultin HM. Et al. Bioconj Chem. 15(2):290-299 (2004). |
Molecular Weight | 1816.1 |
C(Npys)YGRKKRRQRRR-NH2 | |
Sequence(Three-Letter Code) | Cys(Npys) - Tyr - Gly - Arg - Lys - Lys - Arg - Arg - Gln - Arg - Arg - Arg - NH2 |
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小弟是神经科学研究生新生一枚,导师叫我分分钟把钠钾钙离子通道的全细胞记录方法给他,现在查了一些文献有了一些内外液配方,但是不知道电压钳刺激的protocol怎么编。悬赏35蚁豆(基本全部家当)求protocol,只有钙通道的也OK哟~
本人是一名专业研究生,正在参加北京市规培。尽管作为一名专硕,导师交给的却是基础课题,实验需要用到膜片钳,本人对此一无所知,科里实验室目前也没有膜片钳,还要联系外面实验室学习。听一个师兄说,他当初光学技术就有近半年时间,对此真是苦恼,实在觉不出规培能挤出那么多时间。
请问做过的老师,膜片钳学习曲线一般要多久?你们认为我一个专硕在完成规培的前提下能兼顾到膜片钳实验么?
学校的话、中科院神经所有很多膜片钳、清华北大、浙大交大复旦肯定都有,n多学校有,这东西一台约60万,所以不算高端
今天做膜片钳,发现能给出正压,但是刚看到有气流冲出,维持不过5s正压就没有了,而后发现电极立马被堵,一整个下午都无法patch到细胞,有没有人有遇到这种状况,我怀疑是有漏气,求助
2.新陈代谢是生物体进行一切生命活动的基础,是生物最基本的特征,是生物与非生物的最
本质的区别。
3.生物遗传和变异的特征,使各物种既能基本上保持稳定,又能不断地进化。生物的遗传特
性,使生物物种保持相对稳定。生物的变异特性,使生物物种能够产生新的性状,以致形
成新的物种,向前进化发展。
4.生物体具应激性,因而能适应周围环境。生物体都能适应一定的环境,也能影响环境。
5.组成生物体的化学元素,在无机自然界都可以找到,没有一种化学元素是生物界所特有的,这个事实说明生物界和非生物界具统一性。生物界与非生物界还具有差异性。组成生物体的化学元素和化合物是生物体生命活动的物质基础。
6.糖类是细胞的主要能源物质,葡萄糖是细胞的重要能源物质。淀粉和糖元是植物、动物细胞内的储能物质。蛋白质是一切生命活动的体现者。脂肪是生物体的储能物质。核酸是一切生物的遗传物质。
7.组成生物体的任何一种化合物都不能够单独地完成某一种生命活动,只有这些化合物按照一定的方式有机地组织起来,才能表现出细胞和生物体的生命现象。细胞就是这些物质最基本的结构形式。
8.细胞膜具一定的流动性这一结构特点,具选择透过性这一功能特性。
9.细胞壁对植物细胞有支持和保护作用。线粒体是活细胞进行有氧呼吸的主要场所。叶绿体是绿色植物光合作用的场所。核糖体是细胞内将氨基酸合成为蛋白质的场所。染色质和染色体是细胞中同一种物质在不同时期的两种形态。细胞核是遗传物质储存和复制的场所,是细胞遗传特性和细胞代谢活动的控制中心。
10.构成细胞的各部分结构并不是彼此孤立的,而是互相紧密联系、协调一致的,一个细胞是一个有机的统一整体,细胞只有保持完整性,才能够正常地完成各项生命活动。展开
2)内面向外式膜片( inside outpatch)细胞内外和电极内的溶液均可调控,既能较容易地改变细胞内的离子或物质浓度,又能把酶等直接加于膜的内侧面,适宜研究胞内物质对通道活动的影响。但实验中难以改变膜外侧物质,且需浸于低钙液中。常用于研究依赖细胞内钙的离子通道,如钙敏感的钾通道,还可用于细胞内激素和第二信使与通道的调节作用。
3) 外面向外式膜片(outside outpatch)能接触膜的两侧,可以任意改变膜外物质的浓度,有利于研究离子、递质对膜外表面的作用,多用于研究细胞膜外侧受体控制的离子通道。这些受体直接作用于离子通道,而不需经过第二信使系统。因细胞外液容易更换,故加药方便。缺陷是实验中难以改变胞内成分,而且电极管内必须充以低钙液。
4) 全细胞式膜片(whole cell patch)方式使细胞内与浴槽之间的漏流极少。电极本身阻抗(1~10MΩ)与细胞封接后的阻抗相比较低,这种低接触阻抗使单管电压钳容易实现。电极管内与细胞之间弥散交换与平衡快,因而容易控制细胞内液的成分。细胞钳记录的是许多通道的平均电流,有利于综合分析。如果有目的地将膜电位钳制在某一程度,可做到选择性抑制某些通道的活性而只记录某种通道电流的总和,并可在同一细胞上观察几种不同通道的情况。通过改变内部介质,如改变电极液成分,或在电极液中加入所需药物,通过渗透很快改变胞浆成分并达到平衡,该手段在全细胞记录中广泛应用。它适合于小细胞的电压钳位,对于直径大于30μm的细胞很难实现钳位。不足之处是由于电极与细胞间交换快,细胞内环境很容易破坏,因此记录所用的电极液应与胞浆主要成分相同,如高K+,低Na+和Ca2+及一定的缓冲成分和能量代谢所需的物质。
5) 穿孔膜片(perforated patch)是为克服常规全细胞模式的胞质渗漏问题,有学者将与离子亲和的制霉菌素或二性霉素B经微电极灌流到含有类甾醇的细胞膜上,形成只允许一价离子通过的孔,用此法在膜片上做很多导电性孔道,借此对全细胞膜电流进行记录。由于此模式的胞质渗漏极为缓慢,局部串联阻抗较常规全细胞模式高,所以钳制速度很慢,也称为缓慢全细胞模式。
感觉这样的提问没有什么意义
建议,可以自己查阅下资料
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